פוטומטריה המונית לחקר אינטראקציות אנטיגן-נוגדנים ברמת מולקולה אחת

כדי לזהות אינטראקציות אנטיגן-נוגדנים באמצעות פוטומטריית מסה, ראשית, יש לדגור את הריכוז הרצוי של אנטיגנים ונוגדנים מטוהרים לפרק הזמן הנדרש, מה שמקל על קשירת אנטיגן-נוגדנים. בהתבסס על הסטוכיומטריה של קשירת אנטיגן, אזורי הפרטופ של נוגדנים אלה יכולים להכיל מספר משתנה של אנטיגנים מחוברים.

זרימה בתמיסה המכילה את הנוגדנים החופשיים יחד עם קומפלקסי האנטיגן-נוגדנים דרך תא זרימה שהורכב מראש. אבטח את החדר על שלב המיקרוסקופ של פוטומטר מסה. לאחר מכן, כוון את קרן הלייזר דרך תא הזרימה להדמיה אופטימלית.

בהתאם למספר האנטיגנים המחוברים לכל נוגדן, המסה המולקולרית של הקומפלקסים משתנה. שינויים אלה במסה גורמים לקומפלקסים לפזר אור בצורה שונה.

קומפלקסים בעלי מסה מולקולרית גבוהה יותר, שבהם שני אנטיגנים קשורים לשני הפרטופים של נוגדן יחיד, מפזרים יותר אור בהשוואה לקומפלקסים המכילים אנטיגן בודד. בנוסף, נוגדנים חופשיים מראים את הכמות הנמוכה ביותר של פיזור אור.

גלאי אוסף את האור המפוזר ומודד את תדירותו ועוצמתו. הפוטומטר מתעד תנודות באור המפוזר כתבנית התאבכות, ומייצג זאת ככתמים.

כתמים קלושים מתאימים לנוגדנים חופשיים. לעומת זאת, כתמים כהים מאוד מייצגים קומפלקסים עם שני אנטיגנים, והכתם הכהה פחות מכיל אנטיגן אחד קשור.

נוכחותם של כתמים כהים תואמת את האינטראקציות בין אנטיגן לנוגדנים.

כדי להעריך את הזיקה של נוגדנים-אנט