בדיקת צבירת תאים לזיהוי אינטראקציות טרנס בין מולקולות היצמדות תאים

במערכת העצבים, אינטראקציות טרנס-תאיות - אינטראקציות בין מולקולות הידבקות ספציפיות של תאים סינפטיים, חלבונים טרנסממברניים, על נוירונים פרה-סינפטיים ופוסט-סינפטיים - יוצרות קומפלקס בסינפסות, המתווך איתות טרנס-סינפטי.

כדי לזהות אינטראקציות טרנס-תאיות בין מולקולות הידבקות תאים סינפטיות המתבטאות בתאי כליה עובריים אנושיים באמצעות בדיקת צבירת תאים, התחל עם תרחיפי תאים שעברו טרנספקציה.

אוכלוסיית תאים אחת שעברה טרנספטציה מבטאת את מולקולת ההידבקות הקדם-סינפטית הרצויה וחלבון פלואורסצנטי ירוק; השנייה מבטאת את מולקולת ההידבקות הפוסט-סינפטית הספציפית ואת החלבון הפלואורסצנטי האדום. מתקבלות גם שתי אוכלוסיות תאים המבטאות חלבונים פלואורסצנטיים ירוקים ואדומים.

צנטריפוגה התאים. השעו מחדש את התאים במדיה מתאימה בתוספת יוני סידן. מערבבים את התאים המועברים של שתי האוכלוסיות באופן שווה בצינור. חזור על הפעולה עבור אוכלוסיות התאים האחרות.

במהלך הדגירה, יוני הסידן נקשרים לאתר ספציפי בחלבון הפרה-סינפטי המתבטא באוכלוסיית תאים. זה מגביר את האינטראקציה של החלבון הפרה-סינפטי עם הליגנד הפוסט-סינפטי של אוכלוסיית התאים האחרת, מקל על הקשירה, מתווך הידבקות תאים הטרופילים בין תאים אלה ומוביל לצבירת תאים.

תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי, דמו את התאים באמצעות תעלות מתאימות, והדמיינו את הקרינה הירוקה והאדומה של התאים. עבד את התמ