בדיקת צבירת תאים לזיהוי אינטראקציות טרנס בין מולקולות היצמדות תאים

0 views • 4:16 min • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

במערכת העצבים, אינטראקציות טרנס-תאיות - אינטראקציות בין מולקולות הידבקות ספציפיות של תאים סינפטיים, חלבונים טרנסממברניים, על נוירונים פרה-סינפטיים ופוסט-סינפטיים - יוצרות קומפלקס בסינפסות, המתווך איתות טרנס-סינפטי.

כדי לזהות אינטראקציות טרנס-תאיות בין מולקולות הידבקות תאים סינפטיות המתבטאות בתאי כליה עובריים אנושיים באמצעות בדיקת צבירת תאים, התחל עם תרחיפי תאים שעברו טרנספקציה.

אוכלוסיית תאים אחת שעברה טרנספטציה מבטאת את מולקולת ההידבקות הקדם-סינפטית הרצויה וחלבון פלואורסצנטי ירוק; השנייה מבטאת את מולקולת ההידבקות הפוסט-סינפטית הספציפית ואת החלבון הפלואורסצנטי האדום. מתקבלות גם שתי אוכלוסיות תאים המבטאות חלבונים פלואורסצנטיים ירוקים ואדומים.

צנטריפוגה התאים. השעו מחדש את התאים במדיה מתאימה בתוספת יוני סידן. מערבבים את התאים המועברים של שתי האוכלוסיות באופן שווה בצינור. חזור על הפעולה עבור אוכלוסיות התאים האחרות.

במהלך הדגירה, יוני הסידן נקשרים לאתר ספציפי בחלבון הפרה-סינפטי המתבטא באוכלוסיית תאים. זה מגביר את האינטראקציה של החלבון הפרה-סינפטי עם הליגנד הפוסט-סינפטי של אוכלוסיית התאים האחרת, מקל על הקשירה, מתווך הידבקות תאים הטרופילים בין תאים אלה ומוביל לצבירת תאים.

תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי, דמו את התאים באמצעות תעלות מתאימות, והדמיינו את הקרינה הירוקה והאדומה של התאים. עבד את התמונות.

לא נראית צבירה באוכלוסיות התאים המבטאות רק את החלבונים הפלואורסצנטיים. צבירת תאים מוצגת כצהובה עקב חפיפה בין התאים הפלואורסצנטיים הירוקים והאדומים המבטאים את מולקולות ההידבקות של התאים הסינפטיים, מה שמרמז על אינטראקציות טרנס-תאיות בין המולקולות.

48 שעות לאחר העברת HEK293T התאים, קצרו את התאים מצלחת 6 הבארות לצבירה. ראשית, יש לשטוף כל באר פעמיים עם PBS. לאחר מכן, כדי לנתק בעדינות את התאים, הוסף 1 מיליליטר של 10 מילי-מולרי EDTA לכל באר. לאחר מכן, דגרו את הצלחת ב-37 מעלות צלזיוס.

לאחר חמש דקות של דגירה, הקש בעדינות על הצלחת כדי לנתק את התאים, וקצור כל באר לצינור חרוטי נפרד של 15 מיליליטר. צנטריפוגה את הצינורות ב 500 x גרם בטמפרטורת החדר למשך 5 דקות.

בזמן שהתאים מתגלגלים, הכינו שישה צינורות דגירה על ידי סימון החלק העליון של צינורות מיקרו-צנטריפוגה בתנאי הניסוי. יש להשתמש בכל תמורות של GFP ו-mCherry .

הסר את הסופרנטנטים מהצינורות החרוטיים של 15 מיליליטר, והשהה מחדש את התאים ב -500 מיקרוליטר של מדיום. בעזרת המוציטומטר ספרו את התאים בכל צינור חרוטי. לאחר מכן, ציטטו 200,000 תאים מכל מצב לתוך צינור הדגירה המתאים לתערובת אחד לאחד בנפח כולל של 500 מיקרוליטר. הנח את צינורות הדגירה במסובב צינור איטי בטמפרטורת החדר.

כדי להעריך את הצבירה, בנקודת ההתחלה, ושוב לאחר 60 דקות, פיפטה 40 מיקרוליטר מצינור הדגירה על שקופית מיקרוסקופ טעונה. רכישה בסיסית צריכה להיעשות במהירות האפשרית לאחר הוספת תאים לצינור המיקרו-צנטריפוגה.

דמיין את השקופית תחת פלואורסצנטיות בערוץ הירוק והאדום. עבור כל שקופית, צלם תמונות של שלושה שדות ראייה שונים במישור מוקד אחד.

10:44

Anisotropy קרינה ככלי לחקר אינטראקציות חלבון-חלבון

Related Videos

0 Views

08:43

Assay ספקטרוסקופיה התנודות זריחה של אינטראקציות חלבון-חלבון באנשי קשר תא-תא

Related Videos

0 Views

10:25

ניטור אינטראקציות חלבון-ליגנד בתאים אנושיים על ידי NMR כמותי בזמן אמת בתוך התא באמצעות Bioreactor צפיפות תאים גבוהה

Related Videos

0 Views

13:22

תדירות הדבקה Assay עבור באתרו קינטיקס ניתוח חוצה Junctional אינטראקציות מולקולריות על ממשק Cell-Cell

Related Videos

0 Views

04:25

בדיקת הידבקות חוץ גופית לאיתור היצמדות של תאים סרטניים למלכודות חוץ-תאיות של נויטרופילים

Related Videos

0 Views

09:14

סטטי הידבקות Assay לחקר Integrin ההפעלה בT לימפוציטים

Related Videos

0 Views

11:02

Assay פונקציונלי לגאפ junctional בחינה; Electroporation של תאים חסידים על אינדיום הבדיל-אוקסיד

Related Videos

0 Views

08:15

מבחני צבירת חרוז לאפיון של תא המשוערת הידבקות מולקולות

Related Videos

0 Views

07:40

Assay הדבקה תחת מאמץ גזירה לחקר T לימפוציטים-הדבקה אינטראקציות מולקולה

Related Videos

0 Views

05:48

תא מבחני צבירה כדי להעריך את הכריכה של החריץ דרוזופילה עם טרנס-ליגנדים וניגוד שלה על ידי חבר העמים-ליגנדים

Related Videos

0 Views

Last updated: 18 July 2026