טכנולוגיית אינטרפרומטריה ביו-שכבתית לזיהוי אינטראקציות בין ליגנד לאנליט

0 views • 5:13 min • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כדי לזהות אינטראקציות ליגנד-אנליט באמצעות אינטרפרומטריית ביו-שכבה, BLI, התחל עם חיישן ביולוגי סיב אופטי מיובש המקובע על תושבת מכשיר BLI, המוגדר לתוכנית הרצויה.

קצה החיישן הביולוגי מצופה בשכבה תואמת ביולוגית המשותקת בחומצה ניקל-ניטרילוטריאצטית, Ni-NTA, קבוצות. טבלו את קצה החיישן הביולוגי במאגר.

המכשיר פולט אור לבן לעבר החיישן הביולוגי, המוחזר משני ממשקים: שכבת הייחוס הפנימית או האופטית, והשכבה התואמת ביולוגית. הקרניים המוחזרות מפריעות באופן קונסטרוקטיבי או הרסני באורכי גל שונים של אור. גלאי פוטו מזהה את דפוס ההפרעה המתקבל.

לאחר מדידת תגובה אינטרפרומטרית בסיסית, הוסף תמיסת ליגנד מתויגת היסטידין. תגי היסטידין נקשרים לקטיוני ניקל על החיישן הביולוגי, ומשתקים ליגנדים בקצה.

בעקבות השיוך, האור הלבן הנפלט מוחזר מהשכבה האופטית, והשכבה הביו-תואמת משותקת עם ליגנדים בעלי עובי אופטי מוגבר בקצה. זה מגדיל את המרחק בין השכבות הרפלקטיביות, וגורם לשינוי דפוס התאבכות ושינוי אורך גל.

שטפו את הקצה, הסירו ליגנדים לא קשורים. דגירה עם תמיסת אנליט מטרה. האנליט נקשר לליגנד, מגדיל עוד יותר את העובי האופטי בקצה, וגורם לשינוי אורך גל מוגבר.

מקם את קצה החיישן הביולוגי במאגר. רשום את שינוי אורך הגל במהלך דיסוציאציה אנליטית מהליגנד המשותק בקצה.

ניטור השינוי בשינוי אורך הגל לאורך זמן מקל על חקר האינטראקציות המולקולריות בין ליגנדים ואנליטים.

הפעל את מכונת BLItz. ודא שהמכשיר מחובר למחשב דרך יציאת יציאת נתונים USB בחלק האחורי של המכשיר.

במחשב, פתח את התוכנה המשויכת ולחץ על "קינטיקה מתקדמת" בצד שמאל של המסך. בתוכנה, הקלד את כל המידע המתאים על הניסוי תחת כל כותרת מתאימה. לחץ על "סוג חיישן ביולוגי" ובחר "Ni-NTA" מהתפריט הנפתח. ניתן לשנות את משך הזמן של כל שלב מברירת מחדל לפי הצורך. לקבלת תוצאות מיטביות, השתמש במינימום של 30 שניות עבור Baseline ו-Baseline ו-120 שניות עבור Association and Dissociation.

הסר את החיישן הביולוגי ניקל-NTA מיובש מצינור ה-PCR, והצמד אותו לתושבת החיישן הביולוגי במכונה, על ידי החלקת החלק הרחב של החיישן הביולוגי על התושבת.

הנח צינור מיקרו-צנטריפוגה שחור בנפח 0.5 מיליליטר לתוך מחזיק הצינור של המכונה והכניס לתוכו 400 מיקרוליטר של מאגר BLI סגור את מכסה המכונה כך שקצה החיישן הביולוגי ישקע במאגר בצינור המיקרו-צנטריפוגה. לחץ על "הבא" בתוכנה כדי להתחיל להקליט את קו הבסיס הראשוני.

לאחר סיום ההקלטה, פתח את מכסה המכונה. הזז את המחוון ימינה. שלח 4 מיקרוליטר של ליגנד מתויג His בדיאליזה על מחזיק הטיפה, וסגור את מכסה המכונה, שתתחיל אוטומטית להקליט את שלב הטעינה.

לאחר סיום ההקלטה, פתח את מכסה המכונה. הזז את המחוון שמאלה, כך שמחזיק הצינור ימוקם שוב מול החץ השחור. סגור את מכסה המכונה, וודא שקצה החיישן הביולוגי שקוע במאגר ה-BLI של הצינור במחזיק הצינור. המכונה והתוכנה יתחילו להקליט אוטומטית את השלב הבסיסי.

לאחר סיום ההקלטה, פתח את מכסה המכונה. הסר את מחזיק הטיפות ונקה אותו על ידי הוצאת כל חלבון ושטיפתו במים דו-יונים בסך הכל חמש פעמים. השתמש במגבון טישו כדי לנקות את פני השטח של מחזיק הטיפות לאחר הכביסה האחרונה. החזר את מחזיק הטיפה בחזרה למכונה. הזז את המחוון במכונה ימינה כך שמחזיק הטיפה ימוקם שוב מול החץ השחור.

פיפטה 4 מיקרוליטר של אנליט דיאליזה על מחזיק הטיפה וסגור את מכסה המכונה, שתתחיל אוטומטית לתעד את שלב השיוך. לאחר סיום ההקלטה, פתח את מכסה המכונה. הזז את המחוון במכונה ימינה כך שמחזיק הצינור ממוקם שוב מול החץ השחור, וסגור את מכסה המכונה, שיתחיל אוטומטית להקליט את שלב הניתוק.

05:43

חלבון הכנת שיטה לזיהוי התפוקה הגבוהה של חלבוני אינטראקציה עם גורם-שותף גרעיני באמצעות LC-MS / MS ניתוח

Related Videos

0 Views

15:27

קביעת קינטיקה מחייב אנטיגן נוגדן גבוהה זיקה באמצעות ארבע פלטפורמות biosensor

Related Videos

0 Views

10:41

לכידת את האינטראקציה קינטיקה החלבון תעלת יונים עם מולקולות קטנות על ידי וזמינותו אינטרפרומטריה ביו-שכבה

Related Videos

0 Views

11:04

Biomolecular איתור העסקת ההחזרה interferometric דימות חיישן (IRIS)

Related Videos

0 Views

13:57

Interferometry Bio-שכבה למדידת קינטיקה של חלבונים אינטראקציות והשפעות יגנד allosteric

Related Videos

0 Views

09:30

ניתוח דינאמי חלבון מתחמי נאסף בנושא ושוחרר מן Biolayer אינטרפרומטריה ביוסנסור באמצעות ספקטרומטר מסה ואלקטרון

Related Videos

0 Views

07:18

יישום של ביואולייר אינטרפרומטריה (בלי) ללימוד אינטראקציות חלבונים-חלבונים בתמלול

Related Videos

0 Views

08:07

ניתוח אינטראקציות DNA-חלבון עם אינטרפרומטריה ביו-שכבתית מבוססת סטרפטווידין

Related Videos

0 Views

Last updated: 18 July 2026