ספקטרוסקופיית תנודות פלואורסצנטיות לחקר אינטראקציה של חלבונים במגעים עם תאים

ניתן לחקור אינטראקציות תא-תא - בתיווך חלבונים במשטחי תאים שכנים - בתאים חיים באמצעות בדיקת ספקטרוסקופיה של תנודות פלואורסצנטיות.

ראשית, קחו תרביות תאים נפרדות המבטאות קולטן הידבקות - חלבון טרנסממברני. הקולטן בתאים משתי האוכלוסיות מסומן בחלבונים פלואורסצנטיים המופרדים ספקטרלית. תוויות פלואורסצנטיות אלו קיימות על האזור הציטופלזמי של הקולטן, ומונעות הפרעה לאינטראקציה בין התא לתא.

השליכו את המדיום והוסיפו טריפסין, מה שמקל על ניתוק התאים. מערבבים את שתי אוכלוסיות התאים ודוגרים, ומאפשרים לקולטני התאים השכנים ליצור אינטראקציות טרנס-הומוטיפיות.

הנח את התאים תחת מיקרוסקופ קונפוקלי. האירו את הדגימה באמצעות מקורות לייזר באורכי גל מתאימים, הגורמים לפליטה משתי התוויות הפלואורסצנטיות. אתר שני תאים שכנים עם אותות פלואורסצנטיים בצבעים שונים במגע.

רכוש סריקת קו - בניצב לאזור קרומי התאים במגע - באמצעות התעלה הספקטרלית של שתי התוויות הפלואורסצנטיות. הלייזר מתמקד בנפח קטן של הדגימה - נפח הזיהוי. כאשר הקולטנים המסומנים בפלואורסצנט מתפזרים פנימה והחוצה מנפח הזיהוי, עוצמת הקרינה משתנה.

אם הקולטנים של התאים השכנים אינם מתקשרים, הם נעים בנפרד, מה שמוביל לתנודות עצמאיות בעוצמת הקרינה שלהם עם מתאם צולב נמוך.

אם התאים השכנים במגע מתקשרים באמצעות הקולטנים שלהם, החלבונים המקיימים אינטראקציה מתפזרים יחד, וגורמים