JoVE Encyclopedia of Experiments
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 4:43 דק' • July 8th, 2025
כדי להתחיל בבדיקת חיישן ביולוגי מוליך מבוסס β-לקטמאז, קח שבב מתמר עם אלקטרודות עבודה, מונה וייחוס. לאלקטרודה העובדת ציפוי פולימרי מוליך, המאפשר קיבוע אנטיגן מטרה. אלקטרודות הייחוס והנגד חסרות ציפוי פולימרי זה.
הוסף תמיסה המכילה את אנטיגן המטרה על השבב. דגירה. האנטיגן משתתק על פני האלקטרודה העובדת באמצעות אינטראקציות לא קוולנטיות. יש לשטוף כדי להסיר אנטיגנים לא קשורים.
הוסף פתרון חסימה. חלבונים בתמיסה נצמדים לאתרים לא קשורים באלקטרודה העובדת וחוסמים אותם.
הוסף חלבון כימרי דו-פונקציונלי לשבב כדי לזהות את האנטיגן המשותק. החלבון הכימרי מורכב מאנזים β-לקטמז - חלבון חיידקי האחראי על עמידות לאנטיביוטיקה. האנזים מותך לננו-גוף - האזור המשתנה N-terminal של נוגדנים חד-תחומיים.
עם הדגירה, הננו-גוף של החלבון נקשר לאנטיגן המטרה המשותק. יש לשטוף כדי להסיר חלבונים כימריים לא קשורים.
חבר את השבב למולטימטר דיגיטלי הנשלט על ידי מחשב. הוסף תמיסת זיהוי המכילה את האנטיביוטיקה בנזיל פניצילין - מצע ל-β-לקטמאז.
בנזיל פניצילין נקשר ל-β-לקטמאז של החלבון הכימרי הקשור לאנטיגן ועובר הידרוליזה - מה שגורם לשחרור פרוטונים. הפרוטונים גורמים לשינוי במוליכות החשמלית של הפולימר.
שרטט את ההבדל בזמן אמת במוליכות בין אלקטרודת הייחוס לאלקטרודה העובדת עם אנטיגן המטרה המשותק, ואשר את האינטראקציה שלו עם החלבון הכימרי.
כדי להתחיל בבדיקת חיישן ביולוגי מוליך מבוסס β-לקטמאז, קח שבב מתמר עם אלקטרודות עבודה, מונה וייחוס. לאלקטרודה העובדת ציפוי פולימרי מוליך, המאפשר קיבוע אנטיגן מטרה. אלקטרודות הייחוס והנגד חסרות ציפוי פולימרי זה.
הוסף תמיסה המכילה את אנטיגן המטרה על השבב. דגירה. האנטיגן משתתק על פני האלקטרודה העובדת באמצעות אינטראקציות לא קוולנטיות. יש לשטוף כדי להסיר אנטיגנים לא קשורים.
הוסף פתרון חסימה. חלבונים בתמיסה נצמדים לאתרים לא קשורים באלקטרודה העובדת וחוסמים אותם.
הוסף חלבון כימרי דו-פונקציונלי לשבב כדי לזהות את האנטיגן המשותק. החלבון הכימרי מורכב מאנזים β-לקטמז - חלבון חיידקי האחראי על עמידות לאנטיביוטיקה. האנזים מותך לננו-גוף - האזור המשתנה N-terminal של נוגדנים חד-תחומיים.
עם הדגירה, הננו-גוף של החלבון נקשר לאנטיגן המטרה המשותק. יש לשטוף כדי להסיר חלבונים כימריים לא קשורים.
חבר את השבב למולטימטר דיגיטלי הנשלט על ידי מחשב. הוסף תמיסת זיהוי המכילה את האנטיביוטיקה בנזיל פניצילין - מצע ל-β-לקטמאז.
בנזיל פניצילין נקשר ל-β-לקטמאז של החלבון הכימרי הקשור לאנטיגן ועובר הידרוליזה - מה שגורם לשחרור פרוטונים. הפרוטונים גורמים לשינוי במוליכות החשמלית של הפולימר.
שרטט את ההבדל בזמן אמת במוליכות בין אלקטרודת הייחוס לאלקטרודה העובדת עם אנטיגן המטרה המשותק, ואשר את האינטראקציה שלו עם החלבון הכימרי.