תהודה פלסמונית פני השטח לחקר אינטראקציות ביומולקולריות באמצעות שבב חיישן

0 views • 5:21 min • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כדי לבצע תהודה של פלזמון פני השטח, או SPR, לחקר האינטראקציות הביו-מולקולריות, התחל עם שבב חיישן הממוקם מעל גלאי SPR בתא זרימה. לשבב חיישן מצופה מתכת זה יש שכבה של חומר הידרוג'ל המופקדת על פני השבב, מה שהופך אותו למתאים יותר לקיבוע חלבונים.

כיסו את השבב בפפטידים נגיפיים, המקיימים אינטראקציה עם ההידרוג'ל ומשתקים על פני השטח. שטפו עם תמיסת מרווה אלקליין המונעת אינטראקציות חלבון לא ספציפיות.

הפנה אור מקוטב ישירות אל השבב. בזווית התהודה, אלקטרוני המתכת סופגים את האור הזה ומהדהדים, ומפחיתים את עוצמת האור המוחזר בזווית המוחזרת המתאימה.

הפוטו-גלאי אוסף את האור המוחזר הזה, והמעבד ממיר את האות הזה לקו הבסיס, ויוצר חיישן - גרף המייצג את תגובת החיישן כנגד הזמן.

הזרם תמיסה של חומר אנטי-ויראלי לתא הזרימה. במהלך הזרימה, החומרים האנטי-ויראליים מקיימים אינטראקציה עם הפפטידים הנגיפיים המשותקים על השבב. אסוציאציה זו משנה את מקדם השבירה, המשנה את הזווית והעוצמה של האור המוחזר, ובסופו של דבר, וכתוצאה מכך תגובת חיישן.

הוסף מאגר כביסה בעל חוזק יוני גבוה המשבש את האינטראקציה בין שתי המולקולות, מה שמוביל לדיסוציאציה שלהן ולהפחתת תגובת החיישן.

לנתח את צורת החיישן ולהעריך את האסוציאציה והדיסוציאציה של שתי המולקולות החיוניות באינטראקציות ביו-מולקולריות.

עבור מערכת SPR דו-ערוצית, השתמש ב-HBS-EP+ כמאגר פועל, חומצה הידרוכלורית גליצין 10 מילי-מולרית של pH 1.5 עד 1.6 כמאגר ההתחדשות, והפעל את מסיר הגז, הדגימה האוטומטית והמשאבה. לאחר מכן, שטפו את כל המערכת במים מזוקקים כפולים למשך שעה.

לאחר מכן, זרוק שמן טבילה על הגלאי, והרכיב שבב חיישן זכוכית מצופה בסרט זהב דק, ובצד העליון מתפקד עם הידרוג'ל carboxymethyldextran ישירות על הגלאי מתחת לתא הזרימה בעל שלוש היציאות. לאחר מכן, תקן את ההגדרה על ידי משיכת הידית כלפי מטה.

כדי לשתק את הליגנדים החלבונים לשבבי חיישנים, פתח טבלת הפעלה על ידי לחיצה על טופס בשורת התפריטים, והפעל את עורך הטבלאות בתוכנת SPRAutoLink המשולבת. לאחר מכן, בחר ולחץ על BASIC_Immobilization מרשימת טבלאות ההפעלה הזמינות, ובצע את השלבים של הליך הניסוי על מסך המחשב.

לאחר מכן, לחץ על עורך ערכת דוגמאות בקטע הטופס כדי למלא את רשימת הריאגנטים עבור שני מתלים הממוקמים בדגימה האוטומטית לניתוחים נוספים. לחצו על Autosampler Sampler Direct Control ככלי בשורת התפריטים כדי להחזיר את המדפים קדימה או חזרה הביתה, ובחרו 4 מעלות צלזיוס כטמפרטורת הפעולה.

הפעל את המשאבה להחדיר מים מזוקקים כפולים על ידי לחיצה על כלים ו"בקרה ישירה של משאבה", והקלט נתונים על ידי לחיצה על "SPR Instrument Direct Control", ובכל פעם, התחל בחלון החדש שמופיע. לאחר הוספת ריאגנטים לצימוד בבקבוקונים של 300 מיקרוליטר, הכניסו אותם למדפי הדגימה האוטומטית והתחילו את טבלת ההפעלה על ידי לחיצה על הפעל.

לאינטראקציה פשוטה בין חלבון לחלבון לאחר מילוי המשאבה ב-25,000 מיקרוליטר לדקה, בצע התאמה בסיסית למשך 30 שניות. אפשר את התאמת קו הבסיס לאחר מכן עם מים מזוקקים כפולים למשך 1.5 דקות לפני כיבוי משטח השבב המופעל עם 1 אתנולאמין הידרוכלוריד מולארי, pH 8.5. לאחר מכן, העבירו את הצינורות מהדגימה הנוזלית למסיר הגז ממים מזוקקים כפולים לבקבוק עם HBS-EP+.

לחץ על טופס, גלול מטה ושנה ל"עיבוד לאחר "על ידי לחיצה על מצב פעולה זה. לאחר מכן, לחץ על הוסף כדי לבחור עקומות כריכה שנוצרו לאורך זמן בצורת עלילת הנתונים עבור כל תא זרימה, וייצא את שכבת העל כקובץ קרצוף. לאחר מכן, לחץ על קובץ כדי לפתוח את אפשרויות שמירת הקבצים ולקבל עקומות תגובה על ידי יישור עקומות שמאל וימין והפחתת אותות של ערוץ הייחוס השני מאלו של ערוץ הליגנד.

09:09

טכניקה ללא תווית להדמית החלל-הזמן של פרשות תא בודדת

Related Videos

0 Views

11:17

ניתוח השוואתי של הורמון גדילה האנושית בסרום שימוש SPRi, ננו-SPRi ומבחני ELISA

Related Videos

0 Views

17:16

התפתחות ביוסנסור אלקטרוכימי דנ א כדי לזהות חיידק והקאה

Related Videos

0 Views

05:00

הדמיית תהודה פלסמונית מקומית על פני השטח לאיתור הפרשות חלבונים מתא בודד

Related Videos

0 Views

09:35

מדידות בזמן אמת של חלבון ממברנה: קולט אינטראקציות שימוש תהודה Plasmon Surface (SPR)

Related Videos

0 Views

11:44

משטח משופר ראמאן ספקטרוסקופיה איתור של מולקולות ביולוגיות באמצעות EBL מצעי Nanostructured המפוברק

Related Videos

0 Views

09:23

באמצעות תמסורת אופטית יוצאת דופן לכמת סמנים לב בנסיוב אדם

Related Videos

0 Views

09:30

ניתוח דינאמי חלבון מתחמי נאסף בנושא ושוחרר מן Biolayer אינטרפרומטריה ביוסנסור באמצעות ספקטרומטר מסה ואלקטרון

Related Videos

0 Views

07:18

יישום של ביואולייר אינטרפרומטריה (בלי) ללימוד אינטראקציות חלבונים-חלבונים בתמלול

Related Videos

0 Views

06:12

פלטפורמה אנליטית רב-מודאלית על שבב דימות תהודה פלסמון מרובה פני שטח לניתוח תת-קבוצות שלפוחית חוץ-תאית

Related Videos

0 Views

Last updated: 18 July 2026