אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 6:05 דק׳ • July 8th, 2025
ספקטרוסקופיה של תהודה מגנטית גרעינית, או NMR, מאפשרת זיהוי אינטראקציה בין חלבון לחלבון ברמה האטומית.
כדי לחקור אינטראקציות בין חלבונים כדוריים וסליליים, סמן חלבונים כדוריים מטוהרים מסוג בר או מוטנטי עם 15N - איזוטופ חנקן. בצינור NMR, מערבבים את החלבונים הכדוריים והסליליים המסומנים בממס המכיל תקן NMR. הכנס את הצינור לספקטרומטר NMR.
המגנטים של הספקטרומטר מייצרים שדה מגנטי חזק, ומיישרים את 15גרעיני החלבון הכדורי המסומנים ב-N במקביל לשדה. פולס בתדר רדיו, או RF, מעורר את 15גרעיני ה-N כדי ליישר אנטי-מקביל לשדה.
תדר הפולס הנדרש למעבר של 15N גרעינים בין שני המצבים מגדיר את תדר התהודה. נורמליזציה של תדר תהודה של 15N לתקן NMR מודדת את השינוי הכימי של 15N.
השדה המגנטי מותאם כדי ליישר את גרעיני ה-H 1- הקשורים ל-15N - במקביל לשדה. פולסי ה-RF מותאמים, וההסטה הכימית של 1H נרשמת.
במהלך אינטראקציות חלבון, הסביבה הכימית המקיפה את שאריות חומצות האמינו האינטראקטיביות משתנה, ומשנה את הקשרים הכימיים של 15 N-1H ואת התזוזות הכימיות המתאימות. שרטט את ספקטרום 15 N-1H NMR.
ללא חלבונים סליליים, חלבונים כדוריים מסוג בר מציגים פסגות ספקטרליות פתורות היטב. כאשר חלבונים כדוריים סליליים ופראיים מתקשרים, השיא הספקטרלי מצטמצם. לעומת זאת, דגירה של חלבונים סליליים עם חלבונים כדוריים מוטנטיים מביאה להופעת הפסגות הספקטר
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים