שימוש בתצוגת פאגים לבחירת חלבונים בעלי זיקה גבוהה לחלבון מטרה

התחל את תצוגת הפאג'ים על ידי הוספת ספריית פאג'ים לבארות של צלחת מרובת בארות, מצופה בחלבון מטרה. ספריית הפאג'ים מכילה פאג'ים מהונדסים גנטית, שכל אחד מהם מציג וריאנט חלבון בודד המותך לחלבון מעטפת על פני השטח שלו. דגירה, מה שמאפשר לפאג' ולחלבוני המטרה לקיים אינטראקציה.

פאג'ים עם חלבונים בעלי זיקה גבוהה לחלבון יעד נקשרים לחלבון המטרה. שוטפים עם חיץ, מסירים פאג'ים לא קשורים. הוסף תמיסה חומצית, משבש את האינטראקציות של הפאג'ים וחלבון היעד, ומשחרר פאג'ים לתמיסה. לנטרל את ה-pH של התמיסה באמצעות חיץ, תוך שמירה על יציבות הפאג'ים.

העבירו את הפאג'ים לצינור טרי. דגירה עם תמיסה חוסמת המכילה חלבונים, המונעת אינטראקציות לא ספציפיות.

העבירו את הפאג'ים לתרחיף E. coli המתחלק באופן פעיל, מדביקים חיידקים ומתחילים את מחזור שכפול הפאג'ים. תוסף עם פאג'ים עוזרים, המדביקים את החיידקים, ומספקים חלבוני פרווה הדרושים לאריזת הפאג'ים הצאצאים. העבירו את התרחיף למדיום סלקטיבי, המאפשר צמיחת חיידקים נגועים בפאג'ים.

הפאג'ים הצאצאים משתחררים בסופו של דבר לתווך. צנטריפוגה. אסוף את הסופרנטנט המכיל פאג'ים. הוסף תמיסת משקעים, תוך ריכוז חלקיקי הפאג'. צנטריפוגה. השעו מחדש את כדור הפאג 'במאגר, וקבלו מתלה הומוגני.

בצע סבבי בחירת פאג'ים עוקבים; חזור על קשירת חלבון יעד הפאג'ים, פליטה עם שלב מחמיר מוגבר של שטיפת חיץ, ושלבי הגברה