מיקרוסקופ לוקליזציה פוטואקטיבי מצומד פלואורסצנטי דו-מולקולרי

בצורתו הפעילה, מונומר ראס הקשור לקרום פלזמה - חלבון קושר נוקלאוטידים גואנין - מגייס את ראף, חלבון קינאז לא פעיל שנקשר לראס דרך תחום קשירת ה-Ras שלו.

קשירה זו מביאה לקומפלקס Ras-Raf פונקציונלי המפעיל את תהליך האיתות במורד הזרם.

כדי לדמיין את האינטראקציה התוך-תאית של Ras-Raf, התחל עם השעיה של תאים מהונדסים גנטית בשקופית תא היטב. תאים אלה מבטאים שני חלבוני היתוך שאינם פלואורסצנטיים - האחד מורכב מ-Ras המקושר למחצית של פלואורופור הניתן להפעלה דרך מסוף ה-N שלו, והשני הוא Raf המאוחה לחצי השני של אותו פלואורופור במסוף C שלו.

בתוך התאים, חלבוני היתוך המכילים RAS עוגנים בקרום הפלזמה ומקיימים אינטראקציה עם חלבוני היתוך המכילים Raf, ומרכיבים מחדש את שברי החלבון הפלואורסצנטי לפלואורופור שלם הניתן לפוטו-אקטיביות. היעדר קשירת ראס וראף שומר על הפרדה בין שני חצאי הפלואורופור

.

הוסף מגיב מקבע לשקופית. המולקולות המקבעות יוצרות קשרים צולבים עם החלבונים ומייצבות את מתחמי החלבון.

הסר את המגיב המקבע והוסף מאגר הדמיה. הנח את השקופית מתחת למיקרוסקופ פלואורסצנטי המוגדר למיקרוסקופ לוקליזציה פוטו-אקטיבי, PALM. האירו את התאים בלייזר בעוצמה גבוהה, והפעל תת-קבוצה קטנה של מולקולות פלואורסצנטיות.

דמיינו את הקרינה שמקורה באופן אקראי המיוצרת על ידי כל קומפלקס Ras-Raf בגודל ננו, מתויג פלואורופור יחיד, הנראה כנקודות פל