בדיקת Electrophoretic Mobility Shift לזיהוי קומפלקסים של פקטור שעתוק-DNA
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 4:31 דק׳ • July 8th, 2025
חלבונים רגולטוריים, כמו גורמי שעתוק, מזהים ונקשרים לרצפי DNA ספציפיים באזורי המקדם, ומווסתים את ביטוי הגנים.
כדי לזהות אינטראקציות ספציפיות של גורם שעתוק-DNA באמצעות מבחן היסט הניידות האלקטרופורטית, התחל עם צינור המכיל גורם שעתוק רצוי ובדיקות DNA ספציפיות, אינפרא אדום, פלואורסצנטיות מסומנות בצבע פלואורסצנטי במאגר קשירה. דגירה בחושך, מניעת הלבנת צבע.
החוזק היוני וה-pH של המאגר מספקים תנאים מתאימים לגורם השעתוק לזהות ולקשור רצפי קשירה ספציפיים על בדיקת ה-DNA. יוני מגנזיום במאגר מייצבים עוד יותר את קומפלקסי החלבון-DNA.
הוסף צבע טעינה מתאים לתערובת, המסייע לדמיין את התקדמות האלקטרופורזה. טען את התערובת הזו ואת בדיקות ה-DNA לבארות של ג'ל פוליאקרילאמיד טרומי, שאינו מבטל דנטורציה.
בצע אלקטרופורזה בחושך.
השדה החשמלי המופעל גורם לבדיקות DNA בעלות משקל מולקולרי נמוך, לא קשורות וטעונות שלילית לנוע דרך הג'ל לעבר אנודות טעונות חיובית. עם זאת, קומפלקסי בדיקת החלבון-DNA הגדולים - בעלי משקל מולקולרי גבוה יותר - נודדים לאט, מה שמוביל להגירה מאוחרת ולשינוי בניידות ה-DNA בג'ל.
לאחר אלקטרופורזה, סרוק את הג'ל באמצעות מערכת הדמיה אינפרא אדום, הדמיה של בדיקות ה- DNA האינפרא אדום המסומנות בצבע פלואורסצנטי.
רצועת בדיקת DNA חופשית נמצאת בתחתית הג'ל, בעוד קומפלקסים של חלבון-DNA מופיעים כרצועה מוסטת על הג'ל,
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים