אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 7:05 דק׳ • July 8th, 2025
כדי לזהות את אתרי הקישור של חלבון מטרה ב-DNA, התחל עם תאי מבשר אוליגודנדרוציטים המכילים חלבון מטרה המקושר לרצפי DNA ספציפיים בכרומטין.
טפל בתאים באמצעות מאגר ליזה המכיל מעכבי פרוטאז. מאגר הליזיס מבצע ליזה של התאים, בעוד שהמעכבים משביתים פרוטאזות כדי לשמור על שלמות קומפלקסי החלבון-כרומטין.
סוניקציה של התוכן כדי לגזור את הקומפלקסים לשברי כרומטין קטנים יותר, כאשר חלקם שומרים על חלבון המטרה.
צנטריפוגה כדי לגלול את רכיבי התא, ולהעביר את הסופרנטנט המכיל שברי כרומטין לתוך צינור טרי. דגירה עם נוגדנים נגד מטרה הנקשרים באופן ספציפי לחלבון המטרה על שברי הכרומטין.
השלם את הצינור עם חרוזים מגנטיים מצופים חלבון A הנקשרים לאזור Fc של נוגדנים קשורים מראש. הפעל שדה מגנטי כדי לזרז באופן סלקטיבי את חלבוני המטרה הקשורים לנוגדנים המורכבים עם שברי כרומטין.
טפל במתחמי החרוזים עם מאגר פליטה גבוה המכיל מלח כדי לשבש את אינטראקציות החלבון-כרומטין ולשחרר את ה-DNA העירום ללא חלבונים קשורים.
השתמש בממיסים אורגניים כדי לחלץ את ה-DNA. הוסף מאגר הגברה, והפעל תגובת שרשרת פולימראז כדי להגביר את שברי ה-DNA. לאחר הגברה, נתח את רצף ה- DNA.
השווה את רצף התוצרים המוגברים לרצף ה-DNA הגנומי של התא. מצא את האזור עם התאמת רצף בין המקטע ל-DNA הגנומי - בקורלציה עם אתרי קשירת החלבון.
לאחר ספירה בהמוציטומטר, הוסף 20,000 OPCs מטו
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים