JoVE Encyclopedia of Experiments
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 3:36 דק' • July 8th, 2025
כדי לחקור את האינטראקציה בין חלבון קושר פוספוליפידים לשכבת שומנים דו-שכבתית באמצעות מיקרוגרבימטריה מפזרת, קח מיקרו-איזון עם חיישן קוורץ. עם הפעלת מתח מתאים, שכבת הקוורץ - דחוקה בין שתי אלקטרודות מתכת - מתנודדת בתדר מסוים.
הוסף השעיה של שלפוחיות חד-שכבתיות קטנות - המורכבות משכבת שומנים אחת - על החיישן. השלפוחיות סופגות על המשטח ההידרופילי המצופה סיליקה - מגדילות את מסת החיישן ומקטינות באופן יחסי את תדירות התנודה שלו.
השלפוחיות המלאות במאגר פועלות כשכבה ויסקו-אלסטית, מה שמוביל לפיזור - שיכוך התנודה. השלפוחיות שנספחו נקרעות ומשחררות את המאגר הסגור. הירידה במסה כתוצאה מכך מגדילה את תדירות התנודה.
השלפוחיות הקרועות יוצרות שכבה דו-שכבתית רציפה, המחקה קרום ביולוגי. הנוקשות של הדו-שכבתי מפחיתה את הפיזור.
הוסף חיץ המכיל יוני סידן, יחד עם חלבון המטרה. יוני הסידן נקשרים לחלבון ומשנים את הקונפורמציה שלו - מה שמאפשר קשירה למולקולות השומנים בשכבה הדו-שכבתית.
קשירת חלבון מגדילה את מסת החיישן - מה שמוביל לירידה בתדירות. השלמות המבנית של הדו-שכבתי נותרת ללא פגיעה - מה שגורם רק לעלייה קלה בפיזור.
הוסף חומר כלאט כדי לקלוט את יוני הסידן - לנתק את החלבונים מהשכבה הדו-שכבתית.
היעדר חלבונים קשורים מחזיר את התדירות והפיזור של התנודה לרמות שאינן קשורות לחלבון - מה שמאשר שהקישור תלוי אך ורק בסידן ושהדו-שכבתי נשארת שלמה.
עגן בזהירות את החיישנים שנוקו בפלזמה לארבעת תאי הזרימה באמצעות פינצטה. הימנע מכל לחץ או פיתול של התאים והצינורות שעלולים לגרום לדליפה. שטוף את המערכת עם מאגר ציטראט במצב זרימה פתוחה למשך 10 דקות.
הפעל את התוכנית. התחל להקליט כל שינוי בתדירות ובפיזור של הצליל הבסיסי הראשון והצלילים העיליים באמצעות התוכנה עד שקווי הבסיס של התדר והפיזור יציבים.
כאשר קווי הבסיס יציבים, החל את מתלי ה-SUV במאגר ציטראט. בעזרת כלי תגובה, הסר 1.5 מיליליטר מהנפח המת. לאחר מכן, סגור את המערכת במצב זרימת הלולאה. רשום את שינוי פיזור התדרים למשך 10 דקות נוספות.
כאשר ה-SLB יציב, אזן את המערכת עם המאגר הפועל בריכוזי הסידן הנדרשים במצב זרימה פתוחה למשך 40 דקות. הוסיפו את החלבון למאגר הזורם המכיל סידן. בצע את יישום החלבון במצב זרימת לולאה עד להגעה למצב יציב של שיווי משקל.