בדיקת אפנון pH על שכבות שומנים נתמכות לזיהוי אינטראקציות חלבון-פוספואינסיטיד

פוספטידילינוזיטול 4,5-ביספוספט, או PIP2, הוא פוספוליפיד זרחני מינורי הקשור לממברנה. פוספוליפאז C, או PLC, עם תחומי קשירה ספציפיים של PIP2, נקשר ל-PIP2, ויוצר שליחים משניים החיוניים למספר תהליכים תאיים.

כדי לזהות אינטראקציות PLC-PIP2 במבחנה, התחל עם שלפוחית חד-כילמית, רכב שטח, תרחיף חומצי, המורכב מתערובת PIP2 ופוספוליפידים, שאחד מהם מצומד לצבע פלואורסצנטי רגיש ל-pH.

הכניסו את התמיסה לתוך צינור יציאה כניסה וחיבור של מכשיר מיקרו-נוזלי מיוצר שהורכב מראש. העבר ואבטח את המכשיר לשלב מיקרוסקופ פלואורסצנטי. דרך כוח הכבידה, רכבי שטח עוברים דרך רצפת המיקרו-ערוץ, העשויה מכיסוי זכוכית הידרופילית.

רכבי השטח נספגים על משטח הזכוכית, ה-pH של התמיסה מפחית את הדחייה האלקטרוסטטית בין השניים. רכבי השטח מתקשרים עם פני השטח, מתעוותים ומתמזגים ליצירת שלפוחיות גדולות.

לאחר כיסוי פני השטח הקריטי, השלפוחיות נקרעות באופן ספונטני, ויוצרות שכבת שומנים דו-שכבתית, SLB. העבירו חיץ דרך התעלה, והסירו שלפוחיות לא נספגות.

באמצעות ערוץ פלואורסצנטי מתאים, דמיין את המיקרו-ערוץ כדי לדמיין ולמדוד את הקרינה של הצבע הרגיש ל-pH - פלואורסצנטי מאוד ב-pH נמוך - ב-SLB.

הכנס תמיסת PLC רקומביננטית למיקרו-ערוץ. ה-pH הנייטרלי של התמיסה, מתחת לנקודה האיזואלקטרית של ה-PLC, הופך את ה-PLC למטען חיובי.

ה-PLC הרקומביננטי, עם תחום הקישור PI