ספקטרוסקופיית NMR כמותית של מימן בתוך התא לניטור אינטראקציות חלבון-ליגנד

כדי לנטר את האינטראקציות של חלבוני מטרה עם ליגנדים לבדיקת מולקולות קטנות בסביבה תאית ילידית, התחל עם צינור NMR מלא במאגר המכיל פקק ג'ל בבסיס. הזרקו את התאים המבטאים את חלבון המטרה, המוטבעים באגרוז לתוך צינור ה-NMR, ויוצרים מבנים דמויי חוט.

טען את הצינור ליחידת הזרימה של ביו-ריאקטור, המספק מצע גידול לשמירה על כדאיות התא. הכנס את יחידת הזרימה לתוך תהודה מגנטית גרעינית או מכשיר NMR.

תחת שדה מגנטי חזק, גרעיני האטומים של אטומי המימן של החלבונים מתמוגנטים ומתיישרים במקביל לשדה, ומסתגלים למצב של אנרגיה נמוכה.

הפעל פולס בתדר רדיו, הגורם לגרעינים להתיישר אנטי-מקביל לשדה המגנטי, מה שמאפשר להם לעבור למצבים של אנרגיה גבוהה יותר.

לאחר פעימה קצרה, הגרעינים חוזרים למקומם המקורי ופולטים אנרגיה נספגת. הגלאי לוכד אנרגיה זו, ומייצר ספקטרום NMR המייצג את תדרי התהודה של אטום המימן. כל שיא ספקטרלי מתאים לאטום מימן אחר בסביבה אלקטרונית ספציפית.

הוסף מולקולות ליגנד ליחידת הזרימה. אלה חודרים לתוך התאים, מקיימים אינטראקציה עם חלבון המטרה ומשנים את הסביבה האלקטרונית סביב אטומי המימן, וגורמים לשינוי תדר התהודה.

השווה את ספקטרום התמ"ג. ההבדלים הספקטרליים לאחר קשירת ליגנד מצביעים על אינטראקציה מוצלחת בין חלבון לליגנד.

בעזרת פיפטה של פסטר, מלאו את החלק התחתון של צינור ה-NMR של יחידת הזרימה ב-60 עד 70 מיקרוליטר ש