כרומטוגרפיה של אי הכללת גודל עם פיזור אור רב-זוויתי עבור אוליגומרים חלבונים

אוליגומר חלבון הוא קומפלקס של תת-יחידות חלבון מרובות הקשורות יחד ליצירת יחידה פונקציונלית גדולה יותר.

כדי לקבוע את המשקל המולקולרי של מונומרים חלבונים והאוליגומרים שלהם בתמיסה על ידי SEC-MALS, שילוב של כרומטוגרפיה של אי הכללת גודל ופיזור אור רב-זוויתית, התחל בעמודת כרומטוגרפיה של אי הכללת גודל, או SEC.

העמוד מכיל חרוזי ג'ל כדוריים דמויי מסננת נקבוביים הלוכדים בתוכם מולקולות קטנות יותר. איזון העמודה עם מאגר התואם למצב המקורי של החלבון.

טען דגימה המכילה מונומרים ואוליגומרים של חלבון בראש העמודה.

במהלך הזרימה, האוליגומרים עוברים דרך החלל הבין-חלקיקי של העמוד, בעוד המונומרים נלכדים בתוך נקבוביות החרוזים. זה גורם לאוליגומרים החלבונים הגדולים יותר לנוע מהר יותר מאשר המונומרים הקטנים יותר.

כוון את האוליגומרים המהירים, ואחריהם את המונומרים האיטיים, לגלאי MALS.

כשהם עוברים דרך הגלאי, אור לייזר מאיר אותם, המפוזר בזוויות שונות. האוליגומרים מרובי תת-היחידות מפזרים יותר אור מאשר המונומר.

עוצמת האור המפוזר במספר זוויות עומדת ביחס ישר למשקל המולקולרי של החלבון אוליגומר ומונומר.

התחל הליך זה בהכנת מערכת SEC-MALS כמתואר בפרוטוקול הטקסט. בעזרת ריאגנטים בדרגת HPLC, הכינו ליטר אחד של מי מלח עם פוספט עם 50 עד 100 מיליליטר נתרן כלורי. מסננים את המאגר ל-0.1 מיקרון באמצעות מסנן פוליאתר סולפון בבקבוק או דו