סריקה דיפרנציאלית קלורימטריה לחקר DNA Aptamer-Thermolabile Ligand אינטראקציה
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 7:16 דק׳ • July 8th, 2025
קלורימטריית סריקה דיפרנציאלית מסייעת לחקור אינטראקציות ביומולקולות-ליגנד על ידי מדידת החום הנדרש כדי לנטרל את הביו-מולקולה בהיעדר ונוכחות הליגנד.
כדי להתחיל, קח התייחסות המכילה אפטמרים DNA חופשיים - אוליגונוקלאוטידים חד-גדיליים מובנים - ודגימה המכילה אפטמרים הקשורים לליגנד תרמו-לביליים. הליגנדים מייצבים את המבנה המשני של האפטאמר.
בצע סריקה קדימה על ידי חימום התמיסות. עם הגעתם לטמפרטורת ההיתוך, האפטמרים החופשיים מתפרקים.
האפטמרים המיוצבים על ידי ליגנד מתנתקים מהליגנדים ומתפרקים בטמפרטורה גבוהה יחסית, מה שגורם לעלייה בטמפרטורת ההיתוך בהשוואה לאפטמרים החופשיים. בטמפרטורות גבוהות, תת-קבוצה של ליגנדים מקבלת צורה משנית בלתי הפיכה עם זיקה מחייבת נמוכה.
לאחר מכן, בצע סריקה הפוכה על ידי קירור התמיסות על מנת להחזיר את מבנה האפטמר. בטמפרטורה הנמוכה יותר, הליגנדים הראשוניים וההמורים בדגימה נקשרים לאפטמרים.
במהלך הסריקה הקדמית השנייה, האפטמרים הקשורים בזיקה חלשה לליגנדים המומרים מתנתקים ומתפרקים בטמפרטורה נמוכה יותר מאשר האפטמרים הראשוניים הקשורים לליגנד, מה שגורם להורדת הילוך בטמפרטורת ההיתוך.
עם סריקות עוקבות, הליגנדים ממשיכים להמיר לצורה המשנית, וכתוצאה מכך הדלדול המוחלט של הצורה הראשונית. השג את התרמוגרמה.
עם כל סריקה, טמפרטורת ההיתוך של האפטמר הקשור לליגנד משתנה לכיוון האפטמר החופשי, מה שמ
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים