Biomembrane Force Probe כדי לכמת אינטראקציות קולטן-ליגנד
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 5:57 דק׳ • July 8th, 2025
האינטראקציה בין קולטן תאי T, TCR, ופפטיד אנטיגני המוצג על ידי MHC, או קומפלקס תאימות היסטולוגית עיקרי, על תא מציג אנטיגן, APC, גורמת לתא T להפעיל כוח מכני על ה-APC. תופעה זו הכרחית להפעלת תאי T.
כדי לכמת אינטראקציות קולטן-ליגנד באמצעות בדיקת כוח ביו-ממברנה, BFP, התחל עם תא תא מותאם אישית מבוסס שקופיות. הנח את תא התא מתחת למיקרוסקופ.
הזרקת תרחיפים של RBCs נפוחים ביוטיניליים, חרוזי זכוכית בדיקה המצופים בקומפלקסים MHC-סטרפטווידין-ביוטין הקשורים לפפטיד, ותאי T לתוך החדר. מקם את המיקרו-פיפטות המלאות במאגר הבדיקה, המטרה והמסייע, סביב החדר.
שאפו RBC ביוטיניל עם פיפטת הבדיקה, ומקמו אותו באזור ריק. שאפו תא T עם מיקרופיפטת המטרה, ומקמו אותו בצד ימין של ה-RBC. שאפו חרוז בדיקה עם המיקרופיפטה המסייעת, והצמידו אותו לקודקוד ה-RBC. הסטרפטווידין של החרוז נקשר לביוטין של ה-RBC ויוצר בדיקת כוח.
יישר את תא ה-T עם בדיקת הכוח כדי לאפשר ל-TCR לקיים אינטראקציה עם הליגנד שלו - הפפטיד הקשור ל-MHC - ותא ה-T להפעיל כוח על ה-RBC. החזר את תא ה-T כדי לשבור את הקשר TCR-פפטיד, המעוות את ה-RBC ומעביר את החרוז.
מדוד את הכוח הדרוש כדי לשבור את הקשר - קשר חזק יותר זקוק לכוח גבוה יותר וזמן רב יותר לשבירה, מה שמעיד על אורך חיים ארוך יותר.
כדי להתחיל בניסוי BFP, הפעילו את המיקרוסקופ ואת מקור האור. הנח את החדר על המיקרוסק
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים