בדיקת מיקרו-מערך אנטיגן נגיפי לאיתור איזוטיפים של נוגדנים בסרום נגד אנטיגן נגיפי

התחל את בדיקת מיקרו-מערך האנטיגן הנגיפי עם שקופית מיקרו-מערך אנטיגן נגיפי מוכנה.

השקופית מכילה מספר פדים, כל אחד עם מערך יחיד המכיל מאות אנטיגנים מטוהרים של זנים נגיפיים מרובים המודפסים על כתמים המסודרים ברשת. כל נקודה מכילה סוג אנטיגן יחיד הנספג על משטח הניטרוצלולוזה המיקרופורי התלת מימדי.

אבטח את המגלשה לתוך תא לטיפול קל במהלך השלבים הבאים. הוסף מאגר חוסם המכיל חלבונים הנקשרים למשטחים הנותרים של המגלשה כדי למנוע קשירה לא ספציפית של נוגדנים למשטח.

דגרו את שקופית המיקרו-מערך עם סרום אנושי מדולל. איזוטיפים של נוגדנים בסרום, ספציפיים לאנטיגנים בשקופית, מזהים ונקשרים לאפיטופים של האנטיגנים.

הסר את הסרום. יש לשטוף עם חוצץ כדי להסיר נוגדנים וחלבונים לא קשורים בשקופית.

הוסף תערובות נוגדנים משניות מצומדות נקודות קוונטיות, כל אחת עם נקודה קוונטית שונה. הנוגדנים המשניים הספציפיים לאיזוטיפ נקשרים במיוחד לאיזוטיפ הנוגדן בסרום המתאים הקשור לאנטיגנים בשקופית.

השתמש במצלמת מיקרו-מערך כדי לכמת את קשירת הנוגדנים לאנטיגנים בתוך שקופית המיקרו-מערך.

עם עירור באורכי גל מתאימים, הנקודות הקוונטיות הקשורות לנוגדנים משניים חוזרות למצב הקרקע ופולטות אותות פלואורסצנטיים ספציפיים המזוהים על ידי גלאי הפוטו.

עוצמת הקרינה הנקודתית מכמתת את איזוטיפ הנוגדנים בסרום בתוך הסרום הקשור לאנטיגן הבודד.

לאחר תכנות תוכנת ההדפסה עם הפרוטוקול הרצוי, התחל את ריצת ההדפסה. בסיום, הנח שקופיות מיקרו-מערך לא נבדקות בקופסה חסינת אור בארון ייבוש בטמפרטורת החדר.

כדי לבדוק את הסרום לאיתור נוגדנים במיקרו-מערך, השתמש בקליפסים כדי לחבר את כרית השקופיות של המיקרו-מערך כלפי מעלה על תאי הבדיקה, והנח את התאים במסגרות.

היזהר בעת הרכבת המגלשות, מכיוון שהן נשברות בקלות, ובדוק אם יש דליפה לאחר החזרת הנוזלים. במידת הצורך, יש לפרק ולהרכיב מחדש את השקופיות כדי לתקן נזילות.

הרטיבו את השקופיות עם 100 מיקרוליטר של מאגר חוסם מסונן לכל באר, ודללו את הסרום ביחס של 1 ל-100 ב-100 מיקרוליטר של מאגר חוסם לדגימה. לאחר מכן, דגרו את שקופיות המיקרו-מערך המיובשות ואת הסרום המדולל למשך 30 דקות בטמפרטורת החדר ו-100 עד 250 סיבובים לדקה על שייקר מסלולי.

בתום הדגירה השתמשו בקצות פיפטות המחוברות לקו ואקום עם בקבוק איסוף משני כדי לשאוב בזהירות את המאגר החוסם מפינת כל תא מבלי לגעת ברפידות, והוסיפו מיד את הסרום המדולל לרפידות מבלי לאפשר לרפידות להתייבש. לאחר מכן, הניחו את המסגרות המכוסות במגשים המכילים מגבות נייר לחות אטומות לשמירה על לחות, ודגרו את המסגרות למשך הלילה בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס על שייקר נדנדה.

לתיוג נוגדנים משניים מצומדים לנקודות קוונטיות, שאפו בזהירות את הסרה, כפי שהודגם זה עתה, ושטפו את השקופיות בשלוש שטיפות ב-100 מיקרוליטר של מאגר T-TBS טרי לבאר למשך 5 דקות כל אחת על שייקר מסלול. לאחר מכן מדגרים את השקופיות בתערובת של נוגדנים משניים מצומדים לנקודות קוונטיות, ולאחר מכן, שוטפים שלוש פעמים כמתואר בפרוטוקול באותה טכניקה שהודגמה זה עתה.

לאחר הכביסה האחרונה, הסר בזהירות את השקופיות מהתאים, ושטוף בעדינות את השקופיות במים מזוקקים כפולים מסוננים, ולאחר מכן הניח כל שקופית בצינור של 50 מיליליטר. לאחר מכן, יבש את השקופיות באמצעות צנטריפוגה.

כדי לקבל תמונות של שקופיות המיקרו-מערך, הפעל תחילה את המצלמת הניידת, והנח בזהירות את השקופית להדמיה עם הפנים כלפי מטה לתוך מחזיק השקופיות בתא ההדמיה. פתח את תוכנת ההדמיה, ותחת הכרטיסייה "הגדר תמונה", בחר את תצורת השקופית המתאימה.

תחת הכרטיסייה "בקרת תמונה", בחר את ערוץ הפלואורסצנט המתאים, והתאם את זמני החשיפה והרכישה, בהתאם לתגובתיות של הסרה. לאחר מכן, לחץ על 'לכידה' כדי להתחיל ברכישת התמונה. בתום הרכישה, השתמש ברשתות המכוונות על הסמנים הנאמנים כדי לזהות את כתמי המערך.