מיקרוסקופ TIRF להמחשת דינמיקת צימוד אקטין ומיקרוטובול
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 7:27 דק׳ • July 8th, 2025
מונומרים של אקטין מתפלמרים בצורה מכף רגל ועד ראש ליצירת סיבים דקים, הנקראים מיקרו-פילמנטים. באופן דומה, דימרים של טובולין מתפלמרים למיקרו-צינורות גליליים חלולים ארוכים יותר. רכיבי שלד תאים אלה שומרים על צורת התא ומקלים על תנועתיות התא.
כדי לדמיין את דינמיקת הצימוד של אקטין-מיקרו-צינוריות על ידי מיקרוסקופ השתקפות פנימי כולל, TIRF, קח מכלול הדמיה מותאם אישית.
מכלול ההדמיה מורכב משני כיסויים: כיסוי עליון מצופה סילאן m-PEG וכיסוי תחתון מצופה סילאן ביוטין-PEG. שני הכיסויים מרווחים לאורך עם סרט דבק דו צדדי ואטומים בשני הקצוות ליצירת תעלת זרימה.
פיפטה BSA לתוך תעלת הזרימה כדי לקדם את החדר. מוסיפים תמיסת סטרפטווידין ודוגרים. מולקולות הסטרפטווידין נקשרות למולקולות הביוטין המחוברות ל-PEG-silane של הכיסוי התחתון.
הזרמת מאגר TIRF לתעלה. הוסף תמיסת תערובת שלד ציטו המכילה דימרים טובולינים ללא תווית וירוקים עם תווית פלואורופור, יחד עם מונומרים אקטין ללא תווית, מסומנים בביוטין וסגולים עם תיוג פלואורופור.
לאחר מכן, הוסף תמיסת תגובה המכילה ATP - חומר מקדם פילמור אקטין, ו- GTP - חומר מקדם פילמור טובולין, וחלבון צימוד אקטין-מיקרו-צינורות. דגירה.
דימרי הטובולין נקשרים למולקולות ה-GTP ומתפלמרים, בעוד שמונומרי האקטין נקשרים למולקולות ה-ATP ומתפלמרים ליצירת מיקרו-צינורות ומיקרו-פילמנטים, בהתאמה.
הנח את מכ
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים