אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 5:05 דק׳ • July 8th, 2025
מיקרוסקופ יריעות אור סריג, LLSM, מאפשר הדמיה של אינטראקציות קולטן-ליגנד על פני התא בתאים חיים עם רזולוציה מרחבית-זמנית גבוהה.
קח כיסוי המכיל תאים המבטאים ליגנד מותמרים הפולטים פלואורסצנטיות אדומה. חבר את תא הכיסוי כלפי מעלה על מחזיק דגימה משומן. קבע את המחזיק על הפיזו של שלב מיקרוסקופ כדי לאפשר מיקום וסריקה מדויקים של הדגימה במהלך ההדמיה. התאם את הגדרות התוכנה כדי להתמקד בתא יחיד המבטא ליגנד.
העבר את מתלה התא המבטא קולטן על הכיסוי. הקולטנים מתויגים בנוגדנים ירוקים המסומנים בפלואורופור. דמיין את זוגות התאים המקיימים אינטראקציה.
לייזר העירור של המיקרוסקופ פולט קרן לייזר מעגלית מקוטבת ליניארית העוברת דרך עדשות גליליות ליצירת יריעת אור. יריעת האור מוקרנת על גבי מאפנן שמסיר עקיפה עודפת והופך אותה לתבנית סריג דקה במיוחד.
יריעת אור הסריג מאירה קטע דק במיוחד של זוג התאים המקיים אינטראקציה, והפלואורסצנציה הנפלטת מהתאים המקיימים אינטראקציה נלכדת בניצב לקרן האירוע. צלם את זוג התאים המקיימים אינטראקציה במספר מישורי Z, וצלם תמונות דו-ממדיות בכל מישור מוקד עם מצלמה מהירה.
באמצעות תוכנה מתאימה, שלבו את התמונות הללו ליצירת z-stack - תמונה ארבע-ממדית ברזולוציה גבוהה המדגימה את הדינמיקה המרחבית-זמנית של האינטראקציה בין הקולטן לליגנד על פני התא.
הוסף 10 מיליליטר מים ו -30 מיקרוליטר פלואורסצאין לאמבט
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים