מיקרוסקופ Darkfield להמחשת דינמיקה דיפוזית של ננו-מוטות על קרום התא

כדי לחקור דינמיקת דיפוזיה של ננו-מוט זהב על קרום תא חי באמצעות מיקרוסקופ שדה כהה, DFM, בשילוב עם מעקב אחר חלקיק בודד, מתחילים עם כיסוי מעוקר בצלחת תרבית המכילה מדיום מתאים. הוסף את מתלה התא על הכיסוי. המדיום מקל על צמיחת תאים.

דגירה עם ננו-מוטות זהב טעונים חיובית הנספגים על קרום התא הטעון שלילית באמצעות אינטראקציות אלקטרוסטטיות. פיפטה את המדיום מהצלחת לחריץ של שקופית זכוכית. הנח את תא הכיסוי עם הצד כלפי מטה על החריץ, ואטום.

הנח את השקופית על במת מיקרוסקופ השדה האפל. המיקרוסקופ מאיר את הדגימה באור אלכסוני בזווית גבוהה העובר דרך מעבה מיוחד של שדה כהה.

עם הארת הננו-מוטות, האלקטרונים החופשיים על פני הננו-רוד מתנודדים בתדר המהדהד עם האור הפוגע. האלקטרונים המתנודדים מפזרים אור באורך גל מסוים שנלכד על ידי עדשת האובייקט, ומאפשרים הדמיה של ננו-רוד.

באופן דומה, קרום התא - המורכב משומנים וחלבונים - מפזר את האור הפוגע במקדם שבירה גבוה יותר מהמדיום שמסביב, ויוצר תמונה בהירה על רקע כהה. צלם תמונות DFM של סדרות זמן.

באמצעות תוכנה מתאימה, בצע ניתוח מעקב אחר חלקיק בודד על תמונות DFM כדי לדמיין את הדיפוזיה של הננו-מוטות דרך קרום התא ברזולוציה מרחבית-זמנית גבוהה.

התחל בשריפת כיסוי זכוכית טבולה באתנול על הלהבה, והנחת הכיסוי בצלחת תרבית תאים בגודל 35 על 10 מילימטר המכילה 2 מיליליטר של מדיום תרבית תאים