מיקרוסקופ Darkfield להמחשת דינמיקה דיפוזית של ננו-מוטות על קרום התא

0 views • 5:15 min • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כדי לחקור דינמיקת דיפוזיה של ננו-מוט זהב על קרום תא חי באמצעות מיקרוסקופ שדה כהה, DFM, בשילוב עם מעקב אחר חלקיק בודד, מתחילים עם כיסוי מעוקר בצלחת תרבית המכילה מדיום מתאים. הוסף את מתלה התא על הכיסוי. המדיום מקל על צמיחת תאים.

דגירה עם ננו-מוטות זהב טעונים חיובית הנספגים על קרום התא הטעון שלילית באמצעות אינטראקציות אלקטרוסטטיות. פיפטה את המדיום מהצלחת לחריץ של שקופית זכוכית. הנח את תא הכיסוי עם הצד כלפי מטה על החריץ, ואטום.

הנח את השקופית על במת מיקרוסקופ השדה האפל. המיקרוסקופ מאיר את הדגימה באור אלכסוני בזווית גבוהה העובר דרך מעבה מיוחד של שדה כהה.

עם הארת הננו-מוטות, האלקטרונים החופשיים על פני הננו-רוד מתנודדים בתדר המהדהד עם האור הפוגע. האלקטרונים המתנודדים מפזרים אור באורך גל מסוים שנלכד על ידי עדשת האובייקט, ומאפשרים הדמיה של ננו-רוד.

באופן דומה, קרום התא - המורכב משומנים וחלבונים - מפזר את האור הפוגע במקדם שבירה גבוה יותר מהמדיום שמסביב, ויוצר תמונה בהירה על רקע כהה. צלם תמונות DFM של סדרות זמן.

באמצעות תוכנה מתאימה, בצע ניתוח מעקב אחר חלקיק בודד על תמונות DFM כדי לדמיין את הדיפוזיה של הננו-מוטות דרך קרום התא ברזולוציה מרחבית-זמנית גבוהה.

התחל בשריפת כיסוי זכוכית טבולה באתנול על הלהבה, והנחת הכיסוי בצלחת תרבית תאים בגודל 35 על 10 מילימטר המכילה 2 מיליליטר של מדיום תרבית תאים ללא פנול אדום. הוסף 50 מיקרוליטר מתרחיף התאים המעניין על הכיסוי, ונער בעדינות את המנה קדימה ואחורה ושמאלה וימינה כדי לפזר את התאים באופן שווה.

מניחים את המנה בחממת תרבית התאים למשך כ-12 שעות עד שהתאים מגיעים למפגש של 20% עד 40% לפני הוספת 20 מיקרוליטר של ננו-מוטות זהב מצופים CTAB לצלחת. לאחר ניעור עדין כדי לפזר את הננו-מוטות באופן שווה על פני המנה, מניחים את המנה באווירה לחה למשך 5 דקות.

בתום הדגירה, העבירו לאט 100 מיקרוליטר של סופרנטנט מהצלחת לחריץ של מגלשת זכוכית, והניחו בזהירות את תא הכיסוי עם הצד כלפי מטה על חריץ השקופית. לאחר מכן, אטמו את קצה הכיסוי עם לק ותנו ללק להתייבש לפני הנחת השקופית על מיקרוסקופ השדה הכההtage.

למעקב אחר חלקיק בודד על ידי מיקרוסקופ שדה כהה, הנח טיפת שמן על מעבה השדה הכהה הטבול בשמן וסובב את הכפתור עד שהמעבה יוצר קשר עם מגלשת הזכוכית. הנח טיפת שמן על החלק העליון של זכוכית הכיסוי וסובב את כפתור המיקוד עד שמטרת טבילת השמן פי 60 נוגעת בשמן.

הפעל את מקור האור וסובב מעט את כפתור המיקוד כדי למקד את מישור ההדמיה. לאחר מכן, לחץ על סמל המצלמה בתוכנת המיקרוסקופ כדי להקליט סדרת זמן של תמונת פיזור אור לדוגמה באמצעות מצלמת CMOS הצבעונית ולשמור את התמונה בפורמט TIFF.

כדי לחלץ מסלול יחיד לטווח ארוך, פתח את התמונה ב- ImageJ ולחץ על Image | Type | ו- 8 סיביות כדי להמיר את התמונה ממצב RGB למצב 8 סיביות. כדי לכוונן את הניגודיות, לחץ על תמונה | כוונון | בהירות | ניגודיות והגדר את הפרמטרים. בחר חלקיק יעד והשתמש ב-"Control + X" כדי לחתוך את הרקע של סדרת הזמן.

לחצו על Plug-ins | Particle Tracker Classic | ו-Particle Tracker כדי לפתוח את החלון זיהוי חלקיקים וקישור חלקיקים ולהגדיר את הרדיוס ל-6, את החיתוך ל-0 ואת האחוזון ל-0.01%. הגדר את טווח הקישורים ל-10 ואת התזוזה ל-10, ולחץ על "אישור" כדי לפתוח את חלון תוצאות מעקב החלקיקים כדי לראות את התוצאות.

לחץ על "דמיין את כל המסלולים" כדי לבדוק את המסלולים שנוצרו. אם המסלול שנוצר על ידי התוכנה והמסלול הנע של ננו-מוטות הזהב תואמים, לחץ על "שמור דוח מלא" כדי לשמור את התוצאות. אם המסלול שנוצר על ידי התוכנה אינו תואם את המסלול הנע של ננו-מוטות הזהב, לחץ על "קשר מחדש חלקיקים" כדי לקשר מחדש את החלקיקים שזוהו עם טווח קישור ופרמטרים שונים של אחוזונים.

07:30

שיפור האות Nanoprobe מהירה על ידי באתרו בתוך Nanoparticle זהב סינתזה

Related Videos

0 Views

08:13

מדריך לבניית מאוד נוטה נסחף מיקרוסקופ אריח עבור הדמיה מולקולה בודדת שדה-of-view מורחבת

Related Videos

0 Views

07:33

ממברנות שומנים דו-שכבתיות קשורות לניטור העברת חום בין חלקיקי זהב וממברנות שומנים

Related Videos

0 Views

10:26

Live-תא הדמיה של תאים מעבר הבעת חלבונים fluorescently-מתויג מטריקס תלת מימדי

Related Videos

0 Views

14:09

לוקליזציה וכימות יחסית של פחמן בתאים עם Multispectral הדמיה תזרים cytometry

Related Videos

0 Views

15:10

מהדמיה מהירה פלואורסצנטי לחוק דיפוזיה מולקולרי בקרום תא חי במיקרוסקופ מסחרי

Related Videos

0 Views

09:31

זהב nanorod בסיוע גירוי אופטי של תאים עצביים

Related Videos

0 Views

12:15

עיבוד פרוטוקול עבור הניתוח של פעפוע וגודל האשכול של קולטני ממברנה על-ידי קרינה פלואורסצנטית מיקרוסקופ תמונה

Related Videos

0 Views

09:09

הדמיה של דינמיקה דיפוזיונית של ננו-ירדס זהב על קרום התא באמצעות מיקרוסקופיה אחת של ננו-חלקיקים בדארקפילד

Related Videos

0 Views

05:56

ספקטרוסקופיית מתאם פלואורסצנטית של וריאציה נקודתית לניתוח דיפוזיה מולקולרית בקרום הפלזמה של תאים חיים

Related Videos

0 Views

Last updated: 18 July 2026