אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 4:56 דק׳ • July 8th, 2025
נוקלאוזומים - יחידות חוזרות של DNA אוקריוטי - מורכבים מקטעי DNA העטופים סביב ליבות חלבון היסטון. התרת DNA סביב ליבת ההיסטון חיונית לדינמיקה של נוקלאוזום.
כדי ללכוד דינמיקת נוקלאוזום, התחל עם מצע נציץ חלק ופונקציונלי המותקן על מיקרוסקופ כוח אטומי, AFM, שלב סורק. שכבו את המצע עם מאגר המכיל נוקלאוזום.
ה- DNA הנוקלאוזום הטעון שלילית מקיים אינטראקציה עם מטענים חיוביים על הנציץ הפונקציונלי, ומשתק אותם על פני השטח. שטפו את מצע הנציץ המשותק עם חיץ כדי למנוע צפיפות יתר של הנוקלאוזומים.
העבירו את שלב הסורק המכיל נוקלאוזום לתא הדמיה המכיל שלוחה מותקן מראש, עם קצה בקצה ופונה כלפי מעלה לכיוון הנוקלאוזומים.
מלא את החדר במאגר הדמיה. יישר את קרן הלייזר על גב השלוחה כדי להבטיח מדידות סטייה מדויקות.
קצה ה-AFM מתנודד קרוב לנוקלאוזומים העטופים במלואם וסורק על פני השטח כדי למדוד את גובה הנוקלאוזומים במרווחי זמן קבועים.
פתיחת DNA ספונטנית מגדילה את גובה הנוקלאוזום, מחליפה את תנודות הקצה ומובילה לסטייה של שלוחה. סטיית שלוחה זו משנה את מיקום קרן הלייזר המוחזרת, המזוהה על ידי גלאי רגיש למיקום ומייצר תמונות נוקלאוזום טופוגרפיות.
בתמונות AFM, ליבת ההיסטון מופיעה ככתם זוהר עם DNA לא עטוף בגבהים הולכים וגדלים עם הזמן, המעיד על דינמיקה של נוקלאוזום.
השתמש בדבק סורק מוט זכוכית כדי לחבר מוט זכוכית לסורק AFMTAGה.
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים