אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 8:15 דק׳ • July 8th, 2025
גליקוגן, פולימר גלוקוז מסועף, הוא עתודת אנרגיה בתאים בין-תאיים, אינטרמיופיברילריים ותת-סרקולמליים בתוך שריר השלד האנושי.
כדי לכמת את התפלגות הגליקוגן התת-תאית באמצעות מיקרוסקופ אלקטרונים תמסורת, TEM, השג רקמת שריר שלד אנושית מבודדת. יש לתקן עם גלוטראלדהיד כדי לשמר את מבנה הרקמות. לאחר תיקון הרקמה בתמיסת אוסמיום טטרוקסיד ואשלגן פרוציאניד.
קומפלקס האוסמיום-פרוציאניד המופחת נקשר לקבוצות ההידרוקסיל בגליקוגן, ומשפר את הניגודיות של חלקיקי הגליקוגן בשריר. בנוסף, ממברנות ורטיקולום סרקופלזמי - אברון הקשור לממברנה - מוכתמים.
לייבש את הרקמה בהגדלת ריכוזי האתנול. מוטבע בשרף ויוצר גוש מוצק. השג קטעים דקים במיוחד עם סיבי שריר מכוונים לאורך; העברה לרשתות TEM.
טבלו את הרשתות בתמיסת אורניל אצטט, מתכת כבדה. יוני אורניל נקשרים לליפידים וחלבונים בעלי מטען שלילי, מה שהופך אותם לדחוסי אלקטרונים. כתם עם תמיסת ציטראט עופרת.
יוני עופרת נקשרים לאזורים המוכתמים באוסמיום, כולל חלקיקי הגליקוגן, מה שמשפר את הניגודיות. הם גם נקשרים לאזורים המגיבים לאורניל אצטט, ומגבירים את אטימות האלקטרונים.
במהלך הדמיית TEM, כאשר קרני אלקטרונים עוברות דרך הרקמה, אזורים מוכתמים צפופים באלקטרונים, כולל גליקוגן, מפזרים יותר אלקטרונים, בעוד שאזורים לא מוכתמים מעבירים אלקטרונים.
בתמונת TEM בעלת הניגודיות הגבוהה שנוצרה, חלקיקי הגליקו
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים