אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 5:23 דק׳ • July 8th, 2025
כדי לדמיין חלבונים ספציפיים של תגובת נזק ל-DNA בשבירת גדיל כפול של DNA, DSB, אתרים המשתמשים במיקרוסקופיה אימונופלואורסצנטית, מתחילים בשקופיות מיקרוסקופ המכילות חד-שכבות של תאים חד-גרעיניים אנושיים עם DSBs. תקן את התאים עם פרפורמלדהיד.
טפל בחומר ניקוי לא יוני, מחלחל ממברנות לגישה למטרות תוך-תאיות. הוסף תמיסת חסימה המכילה חלבון, החוסמת את אתרי הקישור הלא ספציפיים של התאים. דגירה עם נוגדנים ראשוניים הנקשרים לחלבוני תגובת המטרה.
טפל בתערובת נוגדנים משנית המתויגת בפלואורופורים שונים כדי להיקשר במיוחד לנוגדנים הראשוניים שלהם המחוברים לחלבונים. מכתים DNA עם DAPI. הוסף מדיום הרכבה; הרכיב את הכיסוי.
במהלך מיקרוסקופיה פלואורסצנטית, אלומת האור המתרחשת מגיעה למסנן העירור ומאפשרת לאור באורך גל עירור ספציפי לעבור דרכו. בהגיעו למראה הדיכרואית - מפצל אלומה - אור העירור משתקף באופן סלקטיבי לעבר עדשת האובייקטיב, הממקדת את האור על הדגימה.
אור העירור המתרחש מעורר את האלקטרונים של הפלואורופור למצב אנרגיה גבוה יותר. בחזרה למצב הקרקע, האלקטרונים פולטים אור באורך גל ארוך יותר, שנאסף על ידי עדשת האובייקט, ומועבר בחזרה למראה הדיכרואית.
המראה מאפשרת לאור הקרינה הנפלט לעבור דרך מסנן הפליטה, המאפשר רק לאור הקרינה הרצוי להגיע לגלאי. עבד את התמונות. נתח את המוקדים הפלואורסצנטיים הצבעוניים השונים כדי לדמיין את הל
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים