אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 4:47 דק׳ • July 8th, 2025
זרחונים מרובים בחלבון כרוכים בהוספת קבוצות פוספט לחלבון במיקומים שונים, במיוחד בשאריות סרין ותראונין.
כדי לזהות זרחונים מרובים בחלבון, התחל עם צינור המכיל חלבונים זרחניים המסומנים בחנקן-15, המסייע להבדיל בין מימן אמיד למימנים אחרים בחלבון.
הוסף תרכובת ייחוס פנימית של NMR למדידה מדויקת של תדרי התהודה היחסיים. העבירו את התערובת לצינור תהודה מגנטית גרעינית, או NMR. הכנס את הצינור לצמצם מסתובב, והנח אותו בספקטרומטר NMR.
נוכחותם של פוספטים מציגה השפעות משיכת אלקטרונים בשאריות הסרין והתראונין הזרחניות. כתוצאה מכך, נראה כי מימני האמיד של שאריות זרחניות מוגנים בצפיפות אלקטרונים נמוכה יותר בהשוואה למימן האמיד האחר.
מימן אמיד עם סביבות אלקטרוניות משתנות חווים שדות מגנטיים דיפרנציאליים סביב גרעינים, ומגיעים למצבים של אנרגיה נמוכה.
הפעל פולס קצר בתדר רדיו כדי לעורר את גרעיני המימן למצב אנרגיה גבוה יותר בתדר תהודה ספציפי המבוסס על הסביבה האלקטרונית שלהם.
במהלך הרפיה, הגרעינים חוזרים למצב של אנרגיה נמוכה על ידי שחרור האנרגיה הנספגת שמתגלה כדי לייצר אות NMR.
שרטט ספקטרום NMR דו-ממדי המייצג את מימן האמיד הבודד.
השווה את הספקטרום של החלבון הזרחני לזה של החלבון הלא זרחני. הופעת תהודה נוספת בספקטרום ה-NMR של החלבון הזרחני מאשרת זרחונים מרובים.
ממיסים 4 מיליגרם של 15N ו-13 C מועשר ב-15 N ו-13C מועשר ב
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים