עוף Windowing ביצים למחקרים התפתחותיים

ברוכים הבאים למעבדת קרמר. אני מאט קורן מהמחלקה לנוירוביולוגיה והתנהגות באוניברסיטת קליפורניה אירביין. היום אראה לכם כיצד להכין ביצי תרנגולת למגוון מניפולציות, כולל מיקום חרוצים, הזרקת צבעים או חקירה in ovo.

אם כן, ללא דיחוי נוסף, בואו נתחיל. אוקיי, אנחנו נגש לניקוי הביצה. הסיבה לכך היא שישנם דברים רבים שעלולים להצטבר בתוך האינקובטור.

אנו נאטום זאת בעזרת סרט הדבקה. איננו רוצים שחלקיקים קטנים יחדרו למקום שבו החלון יבוא במגע עם הביצה, מה שיגביר את הסיכוי שהעובר ימות עד למועד שבו נרצה להוציאו. לכן, כפי שראיתם באינקובטור, הביצים מונחות כאשר הצד הרחב פונה כלפי מעלה.

כעת, נסובב את הביצה הצידה. פעולה זו תשיג שתי מטרות: ראשית, החלון שלנו יהיה בדיוק כאן, ושנית, העובר צריך לצוף למעלה כדי שנוכל לבצע בו מניפולציות מכל סוג.

כעת אני עומד להוציא כמה מהם מהמעמד שהיה באינקובטור אל תוך מחזיק ביצים מקרטון. זהו למעשה החלק שמגיע באריזה כאשר הביצים נשלחות. לכן, היום נשתמש בו פשוט כדי להחזיק את הביצים.

כעת, הסידור תלוי בכם. אני מעדיף לעשות זאת בדרך זו מכיוון שאני יכול לגשת לכל הביצים בכל עת ואף אחת מהן אינה נוגעת באחרת. למקרה שאמצא ביצה רופפת שיש בה סדק ואפיל אותה, לכולן יש מעין מרווח קטן זו מזו.

כעת אקח את הגזה שלי, אוציא ערימה כזו ואחלק אותה לשניים. אקח אלכוהול 70% ואמלא אותה עד שאני מרגיש שהחלק התחתון נהיה לח. זאת מכיוון שאשתמש בכל הערימה כדי לנגב את כל הביצים.

אם כך, אסיר רק כמה מהחלק העליון, אמשיך ואעבוד בעיקר על החלק העליון אך למעשה אכסה כמעט את כל הביצה כאן. לאחר סיום הפעולה, האלכוהול מתייבש במהירות רבה ואז נוכל להמשיך ולהדביק עליו סרט דביק. הסרט יידבק היטב, ועד שאסיים סט אחד, בדרך כלל הביצה הראשונה כבר יבשה ונוכל להמשיך לשלב הבא בהכנת הביצה.

לפיכך, החזירו את זה לפח ואנו מוכנים להמשיך לשלב הבא. אוקיי, כעת, לאחר שכל הביצים נגבו עם אלכוהול, נוכל להמשיך וליצור חור ניקוז בצדו הגדול של הביצה, בבסיס הביצה. פעולה זו תאפשר לנו להיכנס ולחלץ מעט albumin, כיוון שאם לא נחלץ את ה-albumin, העובר לא יתמקם כראוי.

איננו יכולים לבצע מניפולציות כלשהן. לכן, הפעולה כוללת פשוט שימוש בלהב כדי להסיר את סרט הפלסטי הזה. הוא מעט אלסטי, וזה מצוין.

זה לא רק מאפשר לנו להתרחב מעל חור אם הוא מעט גדול יותר ממה שהיינו רוצים, אלא שכאשר נכסה למעשה את הביצה כולה, נצטרך למתוח את החלק הזה. כך שהאזור שבו יהיה החלון יהיה מכוסה לחלוטין. לכן אני פשוט אגזור את החלק כך, ואז אכין רצועה של כמילימטר אחד.

וממנו אוכל להכין פיסת סרט ברוחב של כמילימטר רבוע. כעת אני פשוט אמקם אותה מעט מעל התאריך, מצד שמאל. אני פשוט אשים אותה שם ואתם תוכלו לראות אותה.

זה נדבק בצורה טובה מאוד. לאחר מכן אוכל לחזור לרצועה שכבר הכנתי, לגזור חתיכה נוספת של מילימטר אחד מסרט ההדבקה, ושוב, פשוט להניח אותה משמאל למספר שם, שזהו למעשה החלק העליון של הביצה.

כעת, לאחר שהפכנו אותו הצידה, הוא נמצא מימין. וחלקי אחד נוסף כאן. כרגע אינני לובש כפפות, מכיוון שלבישת כפפות תגרום לסרט זה להידבק אליהן, ושטפתי את ידיים.

אני לא באמת מודאג מזיהום של החומר הפעיל על ידי גורמים אחרים בשלב זה. לכן, אקח מספריים עם קצה חד, אכניס אותם למרכז המקום שבו הנחתי את הסרט, ואסובב אותם בתנועה נגד כיוון השעון עד שאני מרגיש שהסרט נקרע מעט.

תוכלו לראות שיש שם חור קטן. כעת, החור אינו צריך להיות גדול מאוד, מכיוון שברגע שנכניס את המזרק, הוא ירחיב את החור מספיק. זה נועד כדי שלא ניכנס ישירות עם מחט וננסה לשבור את הביצה בעזרתה, שכן לעיתים קרובות הדבר יוביל לשבירה של צד שלם של הביצה.

אם כך, לא נוכל להשתמש בביצה יותר. אוקיי, עכשיו אני אגש לריקון הביצה. יש לנו את החור הקטן והנוח בצד, ואני אשתמש במזרק של 10 milliliter ובמחט בעלת gauge גדול למדי כדי לשאוב את ה-albumin.

כעת אני זקוק לכשלושה או ארבעה מיליליטרים, בהחלט יותר משלושה, אך לא הרבה יותר מארבעה וחצי או חמישה. הדבר יאפשר לעובר, שנמצא כעת בחלק העליון, להתרחק מעט מהקליפה. לאחר מכן נוכל לבצע את המניפולציות שלנו.

אם כן, על ידי כניסה בזווית של 45 מעלות, אני נמצא מתחת לחלמון. ואז אני פשוט רוצה לסובב אותו מעט ימינה כדי להחליק מתחתיו, ואפשר ממש להרגיש את קצה המחט נוגע בתחתית הביצה. אני אמשיך ואחלץ בערך שלושה או ארבעה, וזה יוצא בצורה חלקה למדי.

אני אעביר את האלבומין לדלי הפסולת שלי כאן, ועכשיו אוכל להמשיך עם שאר הביצים. אוקיי, אני אמשיך הלאה. תוכלו לראות כאן שהחור שיצרתי לצורך הניקוז מעט גדול יותר מכפי שהייתי רוצה, אך זה בסופו של דבר בסדר.

מה שחשש ממנו הוא שבעת החדרת המחט אני לא אגרום לסדק נוסף. לכן, אני אגש לביצוע הפעולה. אוקיי, אני כבר יכול לראות שיש לביצית סדק קטן.

סדקים קטנים הם מקובלים, אך יש להיות מודאגים כאשר הסדק מתפשט למישור אחר של הביצה. ובמקרה זה, כך קורה. ניתן לראות זאת מהחור.

זה מגיע כמעט עד למעלה. ולמעשה, כאן ימוקם החלון שלנו. לכן, לרוע מזלו של הביצה הזו, נצטרך להשליכה.

אין שום דבר מיוחד בהשלכתו. אין צורך לכתוב פרוטוקול מסוים או כל דבר אחר. פשוט נמשיך ונניח אותו בדלי הפסולת.

אנו משתמשים בפחי האשפה השחורים הללו כדי לסמן אותם כפסולת בעלי חיים, אך מעבר לכך, הנושא כבר טופל. כעת נוכל לעבור לביצה הבאה. אוקיי, כעת לאחר שרוקנו את כל הביצים שלנו, נוכל להמשיך ולסגור את חור הניקוז.

זהו שלב חשוב, כיוון שאם לא נעשה זאת בתוך האינקובטור, עלולה להתרחש התאיידות משמעותית של מה שנותר מהאלבומין. וביצה יבשה היא ביצה מתה. לכן, נמשיך וניקח סרט דביק בגודל דומה ונניח אותו מעל החור, כך שלא נצטרך לדאוג לגשת לחור זה שוב.

במקרים מסוימים, אם תחליטו שתרצו לנסות לנקז עוד אלבומין מהביצה לאחר פתיחתה, חור זה משמש כאזור אטום במידת מה שניתן להחדיר דרכו מחט מבלי לאבד כמות גדולה של אלבומין. אוקיי, זה עובד? אוקיי, כעת נמשיך ונכסה את הביצים בחתיכת סרט הדבקה בגודל מתאים.

אני מדמה זאת למצב שבו מדביקים פיסת סרט דביק על בלון לפני שדוקרים אותו בסיכה. הדבר המגניב הוא שהבלון לא מתפוצץ, ובמקרה זה, סרט דביק קטן על הביצה. הביצה לא נסדקת במספר מקומות, ואז ניתן לאטום את החלון, וכאשר החלון נסגר, בגלל שהשתמשנו בסרט דביק, נוצר מעין איטום נחמד ואיננו צריכים לדאוג מאידוי.

כפי שניתן לראות, גודל הסרט הוא כנראה הגדול ביותר שחתכתי עד כה, אך גם במקרה זה אני אמשיך ואמתח אותו מעט, פשוט אמשוך אותו כדי ליצור מעט מתיחה ואניח אותו מעל הביצה. אני אעקף כאן מאחור ואמתח אותו בזהירות רבה מעל הביצה, כך שלא יהיו קמטות בדיוק במקום שבו יהיה החלון שלי. וניתן לסדר מחדש את הסרט מעט.

זה, זה לא נדבק עד כדי כך שצריך לדאוג. ברגע שזה נדבק, זה נדבק. ואפשר לראות שהאזור הכללי הזה הוא המקום שבו אני אגזור את החלון.

בשלב זה, לאחר שהדבקנו סרט הדבקה על כל הביצים, נוכל להמשיך בחיתוך של "חלון" בחלק העליון. זהו החלק שעשוי להיות הקשה ביותר, ולעתים קרובות זהו השלב שבו תאבדו את מרבית הביצים. לכן, אני פשוט אנגב היטב את המספריים בעזרת גזה ספוגה באלכוהול, ולאחר מכן אייבש אותם.

האלכוהול מתייבש למעט מעצמו, אך אינך רוצה שהאלכוהול יחדור ישירות לתוך הביצה. לכן, אני פשוט אכנס למרכז האזור שבו נמצא הסרט, ושוב, אשתמש בתנועה סיבובית עם השעון ונגד השעון עד שאשמע סדק קטן. ואז אדע שהלהב חדר פנימה.

כעת אני רוצה להזיז את המספריים כך שיהיו כמעט שטוחים על פני השטח של הביצה. לאחר מכן, אבצע גזירות קטנות עד שכל להב המספריים ייכנס פנימה. אחזור לכיוון השני לאחר שאצור מעין חצי עיגול; אני לא רוצה להשלים את העיגול כי אני זקוק לחלון, ואז אוכל פשוט לפתוח את הביצה.

ובשלב זה נראה שהם בערך בגיל שציפיתי שיהיו, אין להם הרבה כלי דם, אך יש מעט דם סביב המקום שבו העובר נמצא, בעיקר מאזור ה-delion שבו הדם התחיל לזרום כעת ופעימות הלב פסקו. לכן אני פשוט אסגור זאת, אשאיר את זה כך על פני השטח, אחזור שוב ואסגור את החלונות. ושוב, פשוט שטוח על פני השטח ובחזרה לצד השני.

ובכן, יש לנו כאן כמה בועות ומתברר שהעובר נמצא בצד. כעת יש שני דברים שניתן לעשות. אם יש לנו מספיק ביציות ואיננו מוטרדים משימוש בכל אחת ואחת מהן, נוכל פשוט להשליך את זו.

או שמה שניתן לעשות הוא לסגור את החלון ולהגדיר זאת כך שהעובר פשוט יצוף למעלה, אל המקום שבו נרצה אותו שוב. עד שנגיע אליו בשלב המניפולציות, ייתכן שהוא יהיה במיקום הרצוי. אם לא, נוכל להשליכו באותו זמן.

מה שעשיתי כאן הוא פשוט להניח את זה בזווית. תהיה מעט נזילת אלבומין, אך הדבר יעזור לעובר לחזור למקומו הדרוש. אוקיי, כעת, לאחר שיש לנו את כל החלונות הללו, עלינו לוודא שהם סגורים; אנחנו רוצים שהם יהיו סגורים לפני שנבצע מניפולציות כלשהן.

כעת ניתן להמשיך ולאטום מחדש את הביצה. אך אם נשאיר פתח פתוח, לעיתים החלמון עלול להחליק החוצה. אם הביצה תטה מעט בזמן ההליכה מחדר לחדר, לא נרצה שכל התוכן יישפך החוצה.

כל מה שאני עושה הוא לחתוך נתח נוסף של סרט הדבק מפלסטיק, ברוחב של מילימטר אחד, ובאורך של בערך שניים או שלושה מילימטרים. אני נוהג להניח אותו בדיוק במרכז, ואם אני מצליח למשוך אותו כלפי מטה לפני הביצה, זה הופך את זה למהודק.

ניתן לראות היכן החלון מתאים, בדיוק במקום שבו היה הסרט השני, במקום שבו חתכנו את החלון, וזה יוצר איטום מספיק עבור השלב הזה. כלומר, אנחנו נבצע מספר מניפולציות בעוד רגע, כך שאין צורך שזה יהיה אטום לחלוטין. כך מכינים ויוצרים חלון בביצים.

לכן, בהצלחה בניסוייכם.