October 1st, 2007
קלות הנגישות של העובר אפשרה לניסויים למפות גורלות התא באמצעות גישות שונות, כולל חומוס שליו מפלצות וסימון צבע מוקד. במאמר זה אנו מדגים אחד הכנת ביצה שיטה כי כבר מותאם במיוחד פעמים הישרדות ארוכה.
ברוכים הבאים למעבדת קרמר. אני מאט קורן, המחלקה לנוירוביולוגיה והתנהגות באוניברסיטת קליפורניה באירווין. היום אני אראה לך כיצד להכין ביצי עוף למגוון מניפולציות, כולל מיקום חרוזים, הזרקת צבעים או בחקר ביציות.
אז בלי להכביר מילים, בואו נתחיל. אוקיי, אז אנחנו הולכים לנקות את הביצה. הסיבה היא שיש הרבה דברים שאפשר לשים בחממה.
אנחנו הולכים לאטום את זה עם סרט. אנחנו לא רוצים שחתיכות קטנות יעקפו את המקום שבו החלון יקבל את הביצית ויגדילו את הסיכוי שהעובר ימות עד שנרצה להוציא אותו. אז אם ראיתם מהחממה, הביצים יושבות כשהצד הגדול פונה כלפי מעלה.
אז מה שאנחנו הולכים לעשות זה ללכת קדימה ולקחת את הביצה ופשוט להפוך אותה הצידה. וזה הולך לעשות שני דברים. ראשית, החלון שלנו יהיה ממש כאן, ושנית, העובר צריך לצוף למעלה כדי שנוכל לבצע כל סוג של מניפולציה.
אז אני הולך להוציא כאן כמה מהמדף שהיה בחממה למחזיק ביצים מקרטון. זו למעשה החתיכה שמגיעה בקופסה בעת מסירת הביצים. אז להיום, אנחנו הולכים להמשיך ולהשתמש בו רק כדי להחזיק את הביצים.
עכשיו ההסדר תלוי בך. אני אוהבת לעשות את זה ככה כי אני יכולה לגשת לכל הביצים בכל עת ואף אחת מהן לא נוגעת אחת בשנייה. למקרה שהייתי מוצא אחד רופף עם סדק והייתי מפיל אותו, לכולם יש קצת מקום אחד מהשני.
אז אני הולך לקחת את הגזה שלי לכאן ופשוט להוציא ערימה יפה כזו ולחלק אותה לשניים. אני הולך לקחת כאן 70% אלכוהול ואני פשוט הולך למלא אותו עד שאוכל להרגיש את התחתית נלחה. וזה בגלל שאני הולך להשתמש בכל הערימה הזו כדי לספוג את כל הביצים.
אז אני פשוט אוריד כמה מהחלק העליון, אעשה את החלק העליון אבל למעשה כמעט אעקוף את כל הביצה כאן. ואחרי שזה נעשה, האלכוהול מתייבש די מהר ואז אנחנו יכולים להמשיך ולשים עליו סרט. הסרט יידבק יפה ועד שאני מסיים סט, אז בדרך כלל הראשון יבש ונוכל להמשיך לשלב הבא בהכנת הביצים שלנו.
אז שוב, הניחו את זה בחזרה לפח ואנחנו מוכנים לעבור לשלב הבא. אוקיי, אז עכשיו כשכל הביצים שלנו נשטפו באלכוהול, אנחנו יכולים להמשיך ולעשות חור ניקוז בצד הגדול של הביצה, בסיס הביצה. וזה יאפשר לנו להיכנס ולחלץ קצת אלבומין כי אם לא נחלץ את האלבומין אז העובר לא יושב כמו שצריך.
אנחנו לא יכולים לעשות שום מניפולציות. אז זה פשוט כרוך בלקחת להב ולקחת את סרט הפלסטיק הזה. זה קצת אלסטי, וזה נהדר.
לא רק שזה מאפשר לנו להתרחב מעל חור אם הוא קצת יותר גדול ממה שהיינו רוצים, אלא שכאשר אנו מכסים את כל הביצה, נצטרך למתוח אותה. אז האזור שבו החלון הולך להיות מכוסה לחלוטין. אז אני פשוט הולך לחתוך את החתיכה ככה ואז ליצור רצועה של מילימטר בערך.
ואז מזה אני יכול להכין בערך מילימטר מרובע. ואז מכאן אני פשוט הולך להמשיך ולמקם אותו ממש מעל התאריך. פשוט שים את זה שם ואתה יכול לראות את זה.
זה נדבק יפה מאוד. ואז אני יכול לחזור לרצועה שכבר הכנתי, לחתוך עוד חתיכת סרט מילימטר. ושוב, פשוט הניחו אותו משמאל למספר שם, שהוא למעשה החלק העליון של הביצה.
עכשיו, כשהפנינו את זה הצידה, זה ימינה. ועוד קטע אחד כאן. עכשיו אני לא לובש כפפות כי לבישת כפפות תגרום לסרט הזה להידבק לכפפות ושטפתי ידיים.
אני לא ממש מודאג לגבי שום דבר אחר שמזהם את הפעילים בשלב זה. אז אני הולך לקחת זוג מספריים עם החוד החד. אני הולך להיכנס למרכז המקום שבו הנחתי את הסרט ואני פשוט הולך לסובב אותו בתנועה נגד כיוון השעון עד שאמלא אותו נשבר רק קצת.
ואתם תראו שיש שם חור קטן. עכשיו החור לא צריך להיות גדול במיוחד כי ברגע שנכניס את המזרק הזה לשם, זה יהפוך את החור לגדול מספיק. אבל זה כדי שלא ניכנס ישר עם מחט וננסה לשבור את הביצה עם זה כי לעתים קרובות זה יוביל להתפרקות כל הצד של הביצה
אז אנחנו לא יכולים להשתמש יותר בביצה. אוקיי, אז עכשיו אני הולך לנקז את הביצה. יש לנו חור קטן ונחמד בצד ואני הולך להשתמש במזרק של 10 מיליליטר ובמחט גדולה למדי כדי להמשיך ולחלץ את האלבומין.
עכשיו אני רוצה בערך שלושה או ארבעה מיליליטר, בהחלט יותר משלושה, לא הרבה יותר מארבעה וחצי או חמישה. זה יאפשר לעובר שלנו שיושב כעת על החלק העליון ליפול מעט הרחק מהקליפה. ואז נוכל לעשות את המניפולציות שלנו.
אז כשאני נכנס בזווית של 45 מעלות, אני מתחת לחלמון. ואז אני רק רוצה לסובב אותו קצת ימינה רק כדי להתגנב לשם ואתה יכול להרגיש את קצה המחט רק נוגע בתחתית הביצה. ואני הולך לחלץ רק שלושה או ארבעה וזה יוצא די יפה.
אני הולך לשים את האלבום הזה בדלי המותניים שלי כאן ועכשיו אני יכול להמשיך עם הביצים האחרות. אוקיי, אז אני הולך להמשיך ולהמשיך. ותראה כאן שהחור שעשיתי לניקוז קצת יותר גדול ממה שהייתי רוצה, אבל זה מתברר כבסדר.
מה שאני רוצה להיות מודאג ממנו הוא שבזמן שאני תוקע את המחט פנימה אני לא מפצח אותה יותר. אז אני הולך לעשות את זה. אוקיי, אז אני כבר יכול לראות שבביצה יש קצת סדק.
עכשיו סדקים קטנים זה בסדר, אבל אתה צריך להיות מודאג כשזה משתרע למישור אחר של הביצה. ובמקרה הזה זה קורה. אתה יכול לראות את זה מהחור.
זה משתרע פחות או יותר עד למעלה. ולמעשה, זה המקום שבו החלון שלנו הולך לשבת. אז לרוע מזלה של הביצה הזו, אנחנו הולכים לזרוק את הביצה הזו.
ואין שום דבר מיוחד בהשלכתו. אתה לא צריך לכתוב פרוטוקול מסוים או משהו. רק הולך לשים אותו בדלי האשפה.
אנחנו משתמשים בפחי האשפה השחורים האלה כדי לייעד אותם כפסולת של בעלי חיים, אבל חוץ מזה, זה כבר טופל. אנחנו יכולים לעבור לביצה הבאה. אוקיי, אז עכשיו אחרי שניקזנו את כל הביצים שלנו, אנחנו יכולים להמשיך ולכסות את חור הניקוז.
עכשיו זה חשוב כי אם לא נעשה את האינקובטור הפנימי, אנחנו יכולים לקבל אידוי אדיר של כל מה שנשאר מהאלבומין. ואז ביצה יבשה היא ביצה מתה. אז אנחנו הולכים להמשיך ופשוט לקחת בערך את אותו גודל של סרט ולהניח אותו מעל החור ולא נצטרך לדאוג להיכנס לחור הזה שוב.
במקרים מסוימים, אם תחליט שאתה רוצה לנסות לנקז עוד אלבומין מביצה, ברגע שהיא נפתחת, החור הזה מתפקד כאזור אטום שאפשר לתקוע בו מחט ולא תאבד הרבה אלבומין. אוקיי, נכון? אוקיי, אז עכשיו אנחנו הולכים לכסות את הביצים בפיסת נייר דבק בגודל יפה.
ואני די מדמה את זה לשים פיסת סרט על בלון לפני שמכניסים לתוכו סיכה קטנה. הדבר המגניב הוא שהבלון לא מתפוצץ ובמקרה הזה סרט קטן מעל הביצה. הביצה לא נסדקת במספר מקומות ואז ניתן לאטום את החלון ואז כשהחלון נסגר, מכיוון שהשתמשנו בסרט הדבקה, זה יוצר סוג של אטימה קטנה ונחמדה ואנחנו לא צריכים לדאוג לגבי אידוי כלשהו.
אז אתם יכולים לראות את גודל הסרט, זה כנראה הגדול ביותר שחתכתי עד כה, אבל גם אז אני הולך למתוח אותו קצת ובאמת פשוט למשוך אותו, קצת מתח שם ולהניח אותו על הביצה. ואני הולך להסתובב כאן מאחור ולמתוח אותו בזהירות רבה מעל הביצה כך שלא יהיו קמטים ממש מעל החלון שלי. ואתה יכול לאפס קצת את הקלטת.
זהו, זה לא נדבק כל כך שאתה צריך לדאוג לגביו. ברגע שהוא נתקע, הוא תקוע. ואתם יכולים לראות את האזור הכללי הזה כאן אני הולך לחתוך את החלון.
אוקיי, אז עכשיו כשיש לנו סרט על כל הביצים, אנחנו יכולים להמשיך ולחתוך חלון למעלה. זה יכול להיות החלק הקשה ביותר ולעתים קרובות זה המקום שבו תאבד את רוב הביציות שלך. אז אני פשוט הולך לנגב היטב את המספריים שלי עם גזה שהייתה עליה אלכוהול ואז להמשיך ופשוט לייבש אותה.
אלכוהול די מתייבש מעצמו, אבל אתה לא רוצה שאלכוהול ייכנס ישר לתוך הביצה. אז אני פשוט הולך להיכנס לאמצע המקום שבו הסרט נמצא ושוב, להשתמש בתנועה עם כיוון השעון נגד כיוון השעון עד שאשמע אותו נסדק קצת. ואז אני יודע שהלהב שלי בפנים.
ואז אני די רוצה להזיז את המספריים שלי החוצה כך שיהיו כמעט שטוחים על פני הביצה. ואז פשוט לעשות חיתוכים זעירים עד שאוכל להכניס לשם את כל חתיכת המספריים. ואני אחזור לכיוון השני ברגע שאעשה את זה בערך חצי עיגול ואני לא רוצה להשלים את העיגול כי אני רוצה חלון, אבל אז אני יכול פשוט להמשיך ולפתוח את הביצה.
וכרגע זה נראה כאילו יש בערך את הגיל שציפיתי שהם יהיו, אין להם הרבה כלי דם, אבל יש קצת דם סביב המקום שבו העובר יושב בעיקר מאזור הדליון שהדם התחיל עכשיו ופעימות הלב נעלמו. אז אני פשוט הולך לסגור את זה, פשוט לתת לזה לשבת ככה למעלה ולהסתובב שוב ואני אמשיך לסגור את החלונות. ושוב, פשוט, פשוט שטוח לפני השטח ובחזרה לכיוון השני.
ובסדר, אז יש לנו כאן כמה בועות ומסתבר שהעובר נמצא בצד. עכשיו יש שני דברים שאנחנו יכולים לעשות כרגע. אם יש לנו הרבה ביצים ואנחנו לא דואגים להשתמש בכל אחת מהן, אנחנו יכולים להמשיך ולזרוק את זה.
או מה שאנחנו יכולים לעשות זה לסגור את החלון ופשוט לכוון אותו כך שהעובר יצוף למעלה למקום שבו אנחנו רוצים אותו שוב. ועד שנגיע לזה במניפולציות שלנו, זה עשוי להיות איפה שאנחנו רוצים את זה. אם לא, נוכל לזרוק אותו באותו זמן.
אז מה שעשיתי כאן זה פשוט להציב את זה בזווית. יהיה לך קצת נגר אלבומין, אבל זה יעזור לעובר הזה לחזור למקום שבו הוא צריך להיות. אוקיי, אז עכשיו כשיש לנו את כל החלונות האלה, אנחנו צריכים לוודא שהם סגורים ואנחנו רק רוצים שהם יהיו סגורים לפני שאנחנו עושים מניפולציות כלשהן.
ואז נוכל להמשיך ולאטום מחדש את הביצה. אבל אם יש לנו חלון פתוח, לפעמים העול יכול לחמוק החוצה. אם אתה יודע שהביצה רק נוטה מעט כשאתה הולך מחדר אחד למשנהו, אתה לא רוצה שכל העסק ייפול.
אז כל מה שאני עושה זה לחתוך עוד מילימטר אורך, או סליחה, מילימטר רוחב, כנראה בערך שלושה, שניים או שלושה מילימטר ואורך חתיכה של סרט הפלסטיק. ואני די אוהב לשים את זה שם רק באמצע. ואם אני יכול למשוך אותה למטה מול הביצה, אז זה די הופך אותה להדוקה.
ואתם יכולים לראות היכן החלון מתאים, בדיוק היכן שהיה הסרט השני, היכן חתכנו את החלון וזה הופך אותו לאטום למדי לזמן הזה. זאת אומרת, אנחנו הולכים לעשות כמה מניפולציות תוך דקה, כך שזה לא צריך להיות אטום לגמרי. אז ככה אתה מכין ומחלחל את הביצים שלך.
אז בהצלחה בניסויים שלך.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
מאמר זה מציג שיטה להכנת ביצי תרנגולת למניפולציות שונות בניסויים נוירוביולוגיים. הטכניקה מותאמת לזמני הישרדות ארוכים, ומסייעת במחקרים על מיפוי גורל תאים.
This method enables reliable access to chicken embryos for developmental studies, supporting target validation in neurobiology research. By optimizing survival times through a simple windowing technique, it reduces experimental variability and improves data consistency for mechanistic studies. The approach facilitates early-stage hypothesis testing in a disease-relevant system, enhancing predictive confidence in target engagement and pathway modulation.
The method fits within the early discovery continuum, supporting hypothesis generation and mechanistic exploration before lead identification. It enables reproducible preparation of embryos for downstream applications in screening and validation workflows.