Name: Intraspinal השתלת תאים עבור מיקוד הורן הגחון צוואר הרחם ב טרשת לרוחב amyotrophic וקורד טראומטית פגיעה בעמוד השדרה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-09-18T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 49 s
Description: למד השתלת תאי מקדם עצביים לחוט השדרה הצווארי בחולדות ובעכברים. שיטה זו מאפשרת מעקב אחרי שרידות, נדידה והתמיינות התאים לאחר השתלה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אני רוצה להודות: לכל חברי Lepore, Maragakis ו רוטשטיין מעבדות לדיון מועיל; ותיקי משותק של אמריקה ח קרייג Neilsen קרן למימון.

<ol><li>Lane, M. A., Fuller, D. D., White, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Respiratory+recovery+following+high+cervical+hemisection%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+neurosciences%22%5BJournal%5D)">Respiratory recovery following high cervical hemisection.</a> Trends in neurosciences. 31, 538-538 (2008).</li>
<li>Kaplan, L. M., Hollander, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Respiratory+dysfunction+in+amyotrophic+lateral+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Chest.+Med%22%5BJournal%5D)">Respiratory dysfunction in amyotrophic lateral sclerosis.</a> Clin. Chest. Med. 15, 675-675 (1994).</li>
<li>Miller, R. G., Rosenberg, J. A., Gelinas, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Practice+parameter%3A+the+care+of+the+patient+with+amyotrophic+lateral+sclerosis+%28an+evidence-based+review%29%3A+report+of+the+Quality+Standards+Subcommittee+of+the+American+Academy+of+Neurology%3A+ALS+Practice+Parameters+Task+Force%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Practice parameter: the care of the patient with amyotrophic lateral sclerosis (an evidence-based review): report of the Quality Standards Subcommittee of the American Academy of Neurology: ALS Practice Parameters Task Force.</a> Neurology. 52, 1311-1323 (1999).</li>
<li>Mitsumoto, H., Chad, D. A., Pioro, E. P. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMitsumoto%2C+H+%22Amyotrophic+lateral+sclerosis%22">Amyotrophic lateral sclerosis</a>. Davis, F. A. , Philadelphia. (1998).</li>
<li>Tandan, R., Bradley, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amyotrophic+leteral+sclerosis%3A+Part+2.+Etiopathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+neurology%22%5BJournal%5D)">Amyotrophic leteral sclerosis: Part 2. Etiopathogenesis.</a> Annals of neurology. 18, 419-419 (1985).</li>
<li>Bruijn, L. I., Miller, T. M., Cleveland, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unraveling+the+mechanisms+involved+in+motor+neuron+degeneration+in+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Unraveling the mechanisms involved in motor neuron degeneration in ALS.</a> Annu Rev Neurosci. 27, 723-723 (2004).</li>
<li>Rosen, D. R., Siddique, T., Patterson, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutations+in+Cu%2FZn+superoxide+dismutase+gene+are+associated+with+familial+amyotrophic+lateral+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Mutations in Cu/Zn superoxide dismutase gene are associated with familial amyotrophic lateral sclerosis.</a> Nature. 362, 59-59 (1993).</li>
<li>Bruijn, L. I., Becher, M. W., Lee, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ALS-linked+SOD1+mutant+G85R+mediates+damage+to+astrocytes+and+promotes+rapidly+progressive+disease+with+SOD1-containing+inclusions%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">ALS-linked SOD1 mutant G85R mediates damage to astrocytes and promotes rapidly progressive disease with SOD1-containing inclusions.</a> Neuron. 18, 327-327 (1997).</li>
<li>Gurney, M. E., Pu, H., Chiu, A. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Motor+neuron+degeneration+in+mice+that+express+a+human+Cu%2CZn+superoxide+dismutase+mutation%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Motor neuron degeneration in mice that express a human Cu,Zn superoxide dismutase mutation.</a> Science. 264, 1772-1775 (1994).</li>
<li>Howland, D. S., Liu, J., She, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Focal+loss+of+the+glutamate+transporter+EAAT2+in+a+transgenic+rat+model+of+SOD1+mutant-mediated+amyotrophic+lateral+sclerosis+%28ALS%29%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Focal loss of the glutamate transporter EAAT2 in a transgenic rat model of SOD1 mutant-mediated amyotrophic lateral sclerosis (ALS).</a> Proc Natl Acad Sci. 99, 1604-1604 (2002).</li>
<li>Nagai, M., Aoki, M., Miyoshi, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rats+expressing+human+cytosolic+copper-zinc+superoxide+dismutase+transgenes+with+amyotrophic+lateral+sclerosis%3A+associated+mutations+develop+motor+neuron+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Rats expressing human cytosolic copper-zinc superoxide dismutase transgenes with amyotrophic lateral sclerosis: associated mutations develop motor neuron disease.</a> J. Neurosci. 21, 9246-9246 (2001).</li>
<li>McDonald, W., Becker, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spinal+cord+injury%3A+promising+interventions+and+realistic+goals%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Phys.+Med.+Rehabi%22%5BJournal%5D)">Spinal cord injury: promising interventions and realistic goals.</a> Am. J. Phys. Med. Rehabi. I82, S38-S38 (2003).</li>
<li>Sandrow-Feinberg, H. R., Zhukareva, V., Santi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PEGylated+interferon-beta+modulates+the+acute+inflammatory+response+and+recovery+when+combined+with+forced+exercise+following+cervical+spinal+contusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+neurology%22%5BJournal%5D)">PEGylated interferon-beta modulates the acute inflammatory response and recovery when combined with forced exercise following cervical spinal contusion injury.</a> Experimental neurology. 223, 439-451 (2010).</li>
<li>Gage, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mammalian+neural+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Mammalian neural stem cells.</a> Science. 287, 1433-1433 (2000).</li>
<li>Lane, M. A., Lee, K. Z., Fuller, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spinal+circuitry+and+respiratory+recovery+following+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Respiratory+physiology+%26+neurobiology%22%5BJournal%5D)">Spinal circuitry and respiratory recovery following spinal cord injury.</a> Respiratory physiology & neurobiology. 169, 123-123 (2009).</li>
<li>Lepore, A. C., Rauck, B., Dejea, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Focal+transplantation-based+astrocyte+replacement+is+neuroprotective+in+a+model+of+motor+neuron+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Focal transplantation-based astrocyte replacement is neuroprotective in a model of motor neuron disease.</a> Nature. 11, 1294-1294 (2008).</li>
<li>Rao, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multipotent+and+Restricted+Precursors+in+the+Central+Nervous+System%5BTitle%5D)+AND+%22Anat+Rec%22%5BJournal%5D)">Multipotent and Restricted Precursors in the Central Nervous System.</a> Anat Rec. 257, 137-137 (1999).</li>
<li>Rao, M. S., Mayer-Proschel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glial-+restricted+precursors+are+derived+from+multipotent+neuroepithelial+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Glial- restricted precursors are derived from multipotent neuroepithelial stem cells.</a> Dev Biol. 188, 48-48 (1997).</li>
<li>Suzuki, M., Tork, C., Shelley, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sexual+dimorphism+in+disease+onset+and+progression+of+a+rat+model+of+ALS.+Sexual+dimorphism+in+disease+onset+and+progression+of+a+rat+model+of+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Amyotroph+Lateral+Scler%22%5BJournal%5D)">Sexual dimorphism in disease onset and progression of a rat model of ALS. Sexual dimorphism in disease onset and progression of a rat model of ALS.</a> Amyotroph Lateral Scler. 8, 20-20 (2007).</li>
<li>Lepore, A. C., Haenggeli, C., Gasmi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraparenchymal+spinal+cord+delivery+of+adeno-associated+virus+IGF-1+is+protective+in+the+SOD1G93A+model+of+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+research%22%5BJournal%5D)">Intraparenchymal spinal cord delivery of adeno-associated virus IGF-1 is protective in the SOD1G93A model of ALS.</a> Brain research. 1185, 256-256 (2007).</li>
<li>Veldink, J. H., Bar, P. R., Joosten, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sexual+differences+in+onset+of+disease+and+response+to+exercise+in+a+transgenic+model+of+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Neuromuscul+Disord%22%5BJournal%5D)">Sexual differences in onset of disease and response to exercise in a transgenic model of ALS.</a> Neuromuscul Disord. 13, 737-737 (2003).</li>
<li>Shumsky, J. S., Lepore, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+Neuronal+and+Glial+Restricted+Precursors+into+Contused+Spinal+Cord+Improves+Bladder+and+Motor+Functions%2C+Decreases+Thermal+Hypersensitivity%2C+and+Modifies+Intraspinal+Circuitry%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Transplantation of Neuronal and Glial Restricted Precursors into Contused Spinal Cord Improves Bladder and Motor Functions, Decreases Thermal Hypersensitivity, and Modifies Intraspinal Circuitry.</a> J. Neurosci. 25, 9624-9624 (2005).</li>
</ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

עבור מחקרים שכללו SOD1 לעכברים וחולדות G93A, גיל ומין להתאים את החיות בתוך קבוצה, ולהפיץ בעלי חיים בתוך החול אותו לקבוצות שונות. עדיף להשתמש בכל בעלי חיים ממין זהה בשני מחא ומודלים SCI כי תהליכי מחלה עשוי להיות שונה בין גברים לנשים, אך זה יכול להיות גם שימושי יש מספיק חיות מן המינים ניתן לזהות ספציפית מין אפקטים, כמו תופעה זו דווחה עם SOD1 חולדות G93A 13 ו SOD1 לעכברים G93A 14,15. קחו למשל את הגיל / נקודה של המחלה (ALS לבעלי חיים) או הזמן שלאחר פצי...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td></tr><tr><td> HBSS </td><td> Gibco </td><td> 14170 </td></tr><tr><td> 0.05% טריפסין </td><td> Gibco </td><td> 25300 </td></tr><tr><td> סויה מעכבי טריפסין (אופציונלי) </td><td> סיגמא </td><td> T-6522 </td></tr><tr><td> Acepromazine maleate (0.7 מ&quot;ג / ק&quot;ג) </td><td> Fermenta לבריאות בעלי חיים </td><td></td></tr><tr><td> קטמין (95 מ&quot;ג / ק&quot;ג) </td><td> Fort Dodge לבריאות בעלי חיים </td><td></td></tr><tr><td> Xylazine (10 מ&quot;ג / ק&quot;ג) </td><td> באייר </td><td></td></tr><tr><td> # 11 נוצה להב כירורגי </td><td> מיקרוסקופית אלקטרונים למדעים </td><td> 72044-11 </td></tr><tr><td> כותנה שקצהו applicators (6 אינץ&#39;) </td><td> דיג </td><td> 23-400-101 </td></tr><tr><td> עכברוש שיניים מלקחיים </td><td> המדע כלים פיין </td><td> עכברוש: ​​11023-15; עכבר: 11042-08 </td></tr><tr><td> בגודל בינוני באביב מספריים </td><td> המדע כלים פיין </td><td> 15012-12 </td></tr><tr><td> מיני האביב מספריים </td><td> המדע כלים פיין </td><td> 15000-10 </td></tr><tr><td> Rongeur </td><td> המדע כלים פיין </td><td> עכברוש: ​​16121-14; עכבר: 16221-14 </td></tr><tr><td> Microknife </td><td> המדע כלים פיין </td><td> 10056-12 </td></tr><tr><td> מחזיקי מחט </td><td> המדע כלים פיין </td><td> 12502-14 </td></tr><tr><td> תפר: 4-0 </td><td> Vicryl </td><td> S-183 </td></tr><tr><td> סטייפלס: 9 מ&quot;מ </td><td> Autoclip </td><td> 427631 </td></tr><tr><td> מהדק: 9 מ&quot;מ (רפלקס # 203-1000) </td><td> העולם מכשירי דיוק </td><td> 5000344 </td></tr><tr><td> משאבת מים חמים (T / משאבה) </td><td> Gaymar </td><td> P / N 07999-000 </td></tr><tr><td> ציקלוספורין: 250.0 mg/5.0 מ&quot;ל אמפולות </td><td> נוברטיס / Sandimmune </td><td> NDC 0078-0109-01 </td></tr><tr><td> FK-506 </td><td> LC מעבדות </td><td> F-4900 </td></tr><tr><td> Rapamycin </td><td> LC מעבדות </td><td> R-5000 </td></tr><tr><td> מזרק </td><td> העולם מכשירי דיוק </td><td> UMP2 </td></tr><tr><td> מיקרו 4 משאבה בקר Microsyringe </td><td> העולם מכשירי דיוק </td><td> UMC4 </td></tr><tr><td> Micromanipulator </td><td> העולם מכשירי דיוק </td><td> Kite-R </td></tr><tr><td> 10.0 מזרק μL המילטון </td><td> המילטון </td><td> 80030 </td></tr><tr><td> המילטון מחטים: 33-מד, שפוע 45 °, 1 אינץ </td><td> המילטון </td><td> 7803-05 </td></tr><tr><td> זכוכית 20.0 pipettes microcapillary μL (אופציונלי) </td><td> קימבל </td><td> 71900-20 </td></tr></tbody></table>

intraspinal השתלת תאים עבור מיקוד הורן הגחון צוואר הרחם ב טרשת לרוחב amyotrophic וקורד טראומטית פגיעה בעמוד השדרה

Intraspinal Cell Transplantation for Targeting Cervical Ventral Horn in Amyotrophic Lateral Sclerosis and Traumatic Spinal Cord Injury

פשרה הנשימה עקב אובדן הסרעפת הנוירון המוטורי היא תוצאה מתישה של חלק גדול של פגיעה בחוט השדרה טראומטי האנושית (SCI) במקרים 1 ו - הוא הגורם האולטימטיבי של מוות בחולים עם הנוירון המוטורי הפרעה, amyotrophic laterals טרשת (ALS) 2. ALS היא מחלה נוירולוגית קטלנית אשר מאופיין ניוון מהיר יחסית של העליון הנוירונים המנוע נמוך יותר. חולים להיכנע בסופו של דבר המחלה על 2-5 שנים בממוצע לאחר האבחון בגלל שיתוק נשימתי כתוצאה מאובדן innnervation הנוירון המוטורי של הסרעפת הסרעפת 3. הרוב המכריע של המקרים הם ספורדיים, ואילו 10% הם של הטופס משפחתית. כעשרים אחוזים ממקרי משפחתית מקושרים מוטציות נקודתיות שונות בגן Cu / Zn superoxide dismutase 1 (SOD1) על כרומוזום 21 4. העכברים הטרנסגניים 4,5 ו - 6 חולדות נושאת מוטציה SOD1 האנושי גנים (G93A, G37R, G86R, G85R) נוצרו, ולמרות קיומם של מודלים של בעלי חיים אחרים של אובדן הנוירון המוטורי, כרגע המודלים הנפוצים ביותר של המחלה . פגיעה בחוט השדרה (SCI) היא קבוצה הטרוגנית של מצבים כתוצאה מטראומה פיזית חוט השדרה, עם תוצאה תפקודית משתנה בהתאם למיקום סוג, וחומרת הפציעה 7. עם זאת, כמחצית האדם במקרים SCI להשפיע על אזורים צוואר הרחם, וכתוצאה מכך תפקוד הנשימה מתישה בשל אובדן מנוע הסרעפת נוירון ופגיעה יורד אקסונים bulbospinal הנשימה 1. מספר מודלים של בעלי חיים של SCI פותחו, עם הנפוצים ביותר ואת קלינית רלוונטית להיות contusion 8. השתלה של מעמדות שונים של תאים עצביים מבשר (NPCs) היא אסטרטגיה טיפולית מבטיחה לטיפול פציעות CNS טראומטית ניוון מוחיים, כולל ה-ALS ו SCI, בגלל היכולת להחליף neuroprotection אבד או CNS מתפקדת סוגי תאים, מספקים, ולספק גורמים גן עניין 9. מודלים בבעלי חיים של שני מחא ו SCI יכול מודל היבטים קליני רלוונטי רבים של מחלות אלו, לרבות הפסד הנוירון המוטורי הסרעפת פשרה בדרכי הנשימה עקב 10,11. כדי להעריך את היעילות של NPC מבוססי אסטרטגיות על תפקודי נשימה אלה במודלים של בעלי חיים מחא ו SCI, התערבויות הסלולר יש להפנות במיוחד אזורים המכילים טיפולית יעדים רלוונטיים, כגון נוירונים מנוע הסרעפת. אנו מספקים פרוטוקול מפורט להשתלה, רב סגמנטלי intraspinal של NPCs לתוך העניין חוט השדרה הצווארי הגחון אפור של מודלים ניווניות כגון SOD1 לעכברים וחולדות G93A, כמו גם חולדות חוט השדרה נפגע עכברים 11.

השתלת מבשר עצבית היא אסטרטגיה מבטיח הגנה ו / או החלפת אבוד / נוירונים מתפקדת צוואר הרחם מנוע הסרעפת של פגיעה בחוט השדרה (SCI) לבין הנוירון המוטורי הפרעה, amyotrophic laterals טרשת (ALS). אנו מספקים פרוטוקול למסירה התא בחוט השדרה הצווארי קרן הגחון במודלים של מכרסמים ALS ו SCI.

Intraspinal השתלת תאים עבור מיקוד הורן הגחון צוואר הרחם ב טרשת לרוחב amyotrophic וקורד טראומטית פגיעה בעמוד השדרה

פגיעה נשימתית עקב אובדן נוירונים מוטוריים של עצב הסרעפת היא תוצאה מחלישה של חלק ניכר מפגיעות חוט השדרה (SCI) טראומטיות בבני אדם...

המטרה הכללית של הליך זה היא ביצוע השתלה רב-מקטעית תוך-שדרתית של תאי אב עצביים אל חוט השדרה הצווארי, לאזור החומר האפור הגבאי (ventral gray matter), הן בחולדות והן בעכברים. דבר זה מושג תחילה על ידי הכנת סוג תאי האב העצביים הרלוונטיים להשתלה, ולאחר מכן ביצוע למינקטומיה (laminectomy) בחוט השדרה בכל אחת מהנקודות שבהן מתוכננת השתלת התאים.בשלב הבא מזריקים את התאים בצורה נכונה במיקומים ובעומקים המתאימים, כדי לכוון במדויק את אספקת התאים לקרן הגבנית (ventral horn) של חוט השדרה הצווארי. השלב הסופי הוא המשך מתן דיכוי חיסוני לבעל החיים עד להקרבתו, כדי להבטיח את הישרדות התאים המשתמרים בחוט השדרה. בסופו של דבר, ניתן לקבל תוצאות למעקב אחר הישרדותם, נדידתם והבידול של תאי מוצא עצביים מושתלים בחוט השדרה הצווארי של מבוגר בנקודות זמן שונות לאחר השתלה, באמצעות שיטות היסטולוגיות כגון אימונוהיסטוכימיה וניתוח מיקרוסקופי עוקב.ההדגמה החזותית בשיטה זו היא קריטית, שכן רבים מהשלבים המורכבים של הניתוח בעמוד השדרה והשתלת התאים קשים ללמידה מכיוון שהם דורשים זהירות רבה וטכניקות ספציפיות, והם הופכים לקלים יותר לביצוע באמצעות הדגמה. במידה ונעשה שימוש בנהלים מומלצים אלו, יש לדכא את מערכת החיסון של בעל החיים שלושה ימים לפני ההשתלה על ידי הזרקות יומיות של 10 milligram per kilogram של cyclosporine A בדרך תת-עורית. במידה ומשתילים תאים המופקים ממכרסמים, יש להזריק 1 milligram per kilogram של FK 5 0 6 ושל rapamycin בדרך תוך-בטנית.במידה ויש להשתיל תאים ממקור אנושי, יש לעצב גם מהדקי ניירות חזקים כדי ליצור רטראקטורים (מסיחים). יש לשבור חלק מהמהדק כדי ליצור וו, ולכופף את הקצה השני של המהדק ללולאה קטנה. לאחר מכן, יש לקשור חוט דרך הלולאה של כל רטראקטור, ולבצע עיקור באוטוקלאב לרטראקטורים ולכל המכשירים שבהם ייעשה שימוש בניתוח ביום הניתוח.הכינו מנות של תאי אב גליאליים או תאים אחרים להשתלה בהתאם להליכים המפורטים בפרוטוקול הכתוב. לאחר קצירת התאים, חלקו את תליית התאים בין מספר מבחנות מיקרו-צנטריפוגה בנפח 1.5 milliliter, ושמרו אותן על קרח רטוב. לאחר מכן, לאחר מתן שיטת הרדמה מתאימה לבעל החיים, ודאו כי הושגה רמת הרדמה מתאימה לניתוח באמצעות ביצוע צביטה בבהו. השתמשו במכונת גילוח חשמלית כדי לגלח את גב בעל החיים; גלחו היטב את השערה מאזור הנמצא מעט rostral לאוזניים ועד למרכז גבו של בעל החיים, והסירו את השערות הגזורות מהעור כדי למנוע חדירתן לתוך החתך. לאחר מכן, השרו פיסת גזה בתמיסת חיטוי של povidone iodine והחילו אותה על העור מעל האזור המגולח. קרצפו לפחות פעמיים עם תמיסת החיטוי ופעמיים עם אלכוהול או חומר חיטוי מדולל בתנועות סיבוביות.התחילו מאתר החתך והתקדמו החוצה לכיוון קו השיער. הניחו רפידה סטרילית של גזה מגולגלת על לוח ניתוח נקי והדביקו את הרפידה ללוח כך שלא תזוז. הניחו את בעל החיים מעל הגזה המגולגלת בתנוחת prune.מתחו את שתי זרועותיו של בעל החיים על גבי הרפידה, ולאחר מכן הדביקו את הזרועות לרפידה וללוח הניתוח כדי להגביה את חוט השדרה הצווארי. פעולה זו תקל על העבודה במהלך הניתוח, שכן חוט השדרה הצווארי נמצא עמוק מתחת לפני העור. יש להשתמש בסביבת ניתוח סטרילית במהלך הליך זה, אם כי הדבר אינו מוצג בסרטון לצורכי הדגמה.ראשית, בעודכם מביטים דרך מיקרוסקופ כירורגי המכוון להגדלה הנמוכה ביותר, השתמשו בסקאלפל סטרילי וחד כדי לבצע חתך בקו האמצע מבסיס הגולגולת ועד לסקפולה. לאחר מכן, בצעו חתך דרך שלוש שכבות השרירים מעל עמוד השדרה. השתמשו בלחץ מספיק כדי לחתוך את כל שכבות השריר במספר המינימלי של חתכים, אך אל תלחצו חזק מדי שכן הדבר עלול לגרום לנזק ברקמות עמוקות יותר באמצעות שני מ swabs עם טיפ צמר.השתמשו בתנועת סיבוב כדי להפריד את השריר העליון מהשריר הפרא-ספינלי (paraspinal muscle). אין לחתוך או לקרוע את השריר, שכן הדבר יגרום לדימום. מקמו ארבעה מהמרחיבים (retractors) שהוכנו באופן עצמאי כדי להרחיק את השריר.לאחר מכן, משכו כל אחד מארבעת המרחיבים לארבעת הפינות והדביקו את החוטים ללוח כדי לקבע את המרחיב. החשיפה הסופית צריכה להיות בצורה של ריבוע או מלבן. השתמשו בפינצטת שיניים ובמספרי קפיץ בגודל בינוני כדי להסיר את השריר הפאראספינלי מהמשטח הגבי של החוליות.בצעו את החתכים קרוב מאוד לעצם כדי לחשוף טוב יותר את פני השטח של העצם. ודאו שהחתכים מקבילים לפני השטח של החוליות, אך היזהרו לא לחתוך לתוך חוט השדרה. החליפו את מספרי הקפיץ בגודל בינוני במספרי גזירה למרקמות גולמיות (raw share).לאחר מכן, קבע את כל עמוד השדרה על ידי תפיסת השריר מעל תהליך C2 באמצעות פינצטת שן לחולדה, והשתמש ב-raw she כדי להסיר את השריר בגבהים C4, C5 ו-C6. לאחר מכן, התחל בלמינקטומיה (laminectomy) ב-C5. שוב, קבע את האזור על ידי החזקת C2 עם פינצטת שן לחולדה.אחזו בלמינה (lamina) כולה באמצעות המספריים והמיקומו של הכלי כך שיהיה ניצב לחלוטין לציר עמוד השדרה. מעכו את הלמינה באיטיות ובזהירות, מבלי לדחוף פנימה אל תוך חוט השדרה. לאחר מכן, משכו בעדינות את רסיס העצם השבור כלפי מעלה.בשלב הבא, מקם את ה-raw ger בניצב לעמוד השדרה. לאחר מכן, הכנס את ה-raw ger בעדינות מתחת לעצם בזווית של 30 עד 60 מעלות ביחס לפני השטח של חוט השדרה. בצע חתכים קטנים כדי להרחיב את הלמינקטומיה לכל הלמינה שבין C4 ל-C6.אין להרחיב את הלמינקטומיה רבות לצדדים, שכן הדבר יגרום לדימום. הגבירו את הגדלת המיקרוסקופ לכ-15 x ומקדו את המיקוד על חוט השדרה. השתמשו במכשיר חיתוך ישר וחד.השתמשו בפינצטה מספר חמש כדי לנקות את רקמת החיבור שמעל הק TRADE-dura. לאחר מכן, השתמשו במספרי קפיץ מיניאטוריים או בסכין מיקרו כדי לבצע חתך ב-dura במקביל לציר עמוד השדרה. בנקודה הנמצאת מדיאלית לאזור הכניסה של השורשים הגביים (dorsal rootlets), וודאו שה-dura ננקבה באתר ההזרקה.לאחר הדקירה, נוזל החוט השדרה (CSF) יעלה מהקרומים (dura); ייבשו את פני השטח של חוט השדרה ואת כל אזור החשיפה באמצעות גזה או מקלון צמר. השתמשו בפינצטה כדי לתפוס ולהרים מעט את הקרומים הרחק מחוט השדרה, מבלי ללחוץ על חוט השדרה או לפגוע בו. הרחיבו מעט את החתך לאורך הציר הרוסטראלי של חוט השדרה באמצעות מזרק בעל מחט נשלפת מסוג Hamilton gast בנפח 10 microliter.צויד במחט מתכת של Hamilton במידה 33 עם חיתוך אלכסוני של 45 מעלות. טענו באיטיות את הנפח הנדרש של תרחיף התאים עבור אתר הזרקה אחד. הורידו את קצה המחט לעבר פני השטח הדורסליים של חוט השדרה תוך כדי מעקב אחר התקדמותה דרך המיקרוסקופ.יישרו את המזרק עם הציר של עמוד השדרה כדי לכוון כראוי לאזור האנטומי הרצוי, כאשר המחט מכוונת לזווית הקרובה ככל האפשר ל-90 מעלות ובמיקום מדיאלי סמוך לאזור הכניסה של שורשי הגב (dorsal rootlets). געו בעדינות בפני השטח של חוט השדרה באמצעות קצה המחט, תוך לחיצה קלה על חוט השדרה עם קצה המחט. לאחר מכן, משכו את המחט חזרה עד שחוט השדרה חוזר למקומו הרגיל.רשמו מיקום זה כ-Z השווה ל-0.0 באמצעות הסרגל שעל המיקרו-מניפולטור. לאחר מכן, תוך써 ניטור ויזואלי של ההתקדמות דרך המיקרוסקופ, הנמיכו מעט את המחט אל תוך חוט השדרה. הנמיכו את המחט למרחק של 1.5 millimeters כדי להגיע לקרן הבטנית (ventral horn) בחולדה בוגרת.השאירו את המחט במקומה למשך שתי עד חמש דקות לפני תחילת ההזרקה. ודאו כי מערך הניתוח נשאר ללא הפרעה במהלך זמן זה. לאחר מכן, הזיקו שני מיקרוליטרים של תאים במשך שתי עד חמש דקות בקצב קבוע באמצעות בקר המשאבה. לאחר ההזרקה, השאירו את המחט במקומה למשך שתי עד חמש דקות.לאחר מכן, הוצא בזהירות את המחט מחוט השדרה. חזור על תהליך ההזרקה עבור אתרי מטרה אחרים. לאחר שהוזרקו כל אתרי המטרה, החזר את המיקרוסקופ להגדלה הנמוכה ביותר ובצע תפירה.סגרו את שלוש שכבות השרירים העליונות בבת אחת באמצעות תפרירי 4-0 בארבעה מוקדים לאורך הציר הקודלי (קדמי). סגרו את העור באמצעות סיכות לסגירת פצעים של 9 מילימטר, תוך הבטחה שהסיכות מרווחות במרחק של כ-0.5 סנטימטרים זו מזו. הדקו את הסיכות בעזרת מחזיקי מחטים כדי למנוע מהחיה לתלוש את הסיכות לפני ריפוי מלא של הפצע.מרחו תמיסת חיטוי povidone IRD על אזור פצע החיתוך בעזרת גזה ספוגה, והנחו את בעל החיים להתאושש מההרדמה על גבי פד מים חמים במעגל סירקולציה. המשיכו בהזרקות יומיות של cyclosporine A או FK 5 0 6 rapamycin עד להקרבה של 50, 000 עכברים שהגיעו. תאי Glio progenitor הושתלו בקרן הגב (ventral horn) של חוט השדרה בגובה C four בחולדה מסוג SOD one G 93 a.תמונה זו מראה כי שני עכברים חיוביים הגיעו, תאים מושתלים שרדו חודש לאחר ההשתלה, והתאים התמקמו בחומר האפור הגבאי (ventral gray matter), אך אתר ההזרקה המדיאלי החמיץ את הקרן הגבאית הלטראלית כפי שמסומן בקו המקווקו. כפי שניתן לראות כאן, הזרקה של מספר רב יותר של תאים לאזור זה גורמת לנזק באתר ההזרקה ולאורך מסלול המחט. לאחר רכישת מיומנות, ניתן לבצע טכניקה זו בערך ב-45 עד 60 דקות עבור שישה אתרי הזרקה, במידה והיא מבוצעת כראוי.

intraspinal-cell-transplantation-for-targeting-cervical-ventral-horn

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

השתלה של תאים העכבר גזע עצביים (NSCs) לתוך מיתרי השדרה של עכברים עם demyelination הוקמה מפורט. הכנה של NSCs, laminectomy של החוליה החזי 9 (T9), וכן השתלת NSCs מתוארת יחד עם הטיפול לפני ואחרי הניתוח של העכברים.

כירורגי של השתלת תאים עכבר גזע עצביים לתוך מיתרי השדרה של עכברים נגועים בנגיף הפטיטיס עכבר Neurotropic

מקור: Zweckberger, K., et al. שימוש סינרגטי בתאי קודמן עצביים ופפטידים בהרכבה עצמית בפגיעה ניסיונית בחוט השדרה הצווארי.  J. Vis. Exp. (2015).פרוטוקול זה מדגים גישת הזרקה ממוקדת לתיקון פגיעות בחוט השדרה במודל חולדות. זה כרוך בהעברת פפטידים בהרכבה עצמית (SAPs) לליבת הנגע כדי ליצור פיגום תומך, ולאחר מכן הזרקות של תא מבשר עצבי (NPC) סביב הנגע כדי לעצב מחדש את הרקמה.

הזרקת פפטידים בהרכבה עצמית ותאי קודמן עצביים לתיקון חוט השדרה במודל חולדה

מטריצות הפיברין המכילות גורמי גדילה שימשו כדי לשמר את תאי גזע עצביים מורכבים לתוך אתרים של חיתוך רוחב חוט השדרה. תאים מורכבים מלאים לחלוטין חלל הנגע ומובחן לסוגים שונים עצבי תאים, כוללים תאי עצב שהשתרעו אקסונים לחוט השדרה מארח על פני מרחקים ארוכים.

קידום ההישרדות וההתמיינות של תאי גזע עצביים עם פיברין וקוקטיילי גורם גדילה לאחר פגיעה בחוט השדרה חמורה

טיפול בפגיעה בחוט השדרה הצווארי עם פפטידים בהרכבה עצמית (SAP) ותאי מבשר עצביים (NPC), יחד עם גורמי גדילה, היא גישה מבטיחה לקידום התחדשות והתאוששות. הוקם מודל עכברוש קליפ מפרצת חבלה/דחיסה של SCI צוואר הרחם וטיפול משולב הכולל הזרקת SAP והשתלת NPC.

שימוש סינרגטי של תאים עצביים מבשר ופפטידים עצמי הרכבה בפגיעה בחוט השדרה הניסויית צוואר הרחם

פגיעה בחוט השדרה היא מצב טראומטי שגורם לתחלואה קשה ותמותה גבוהה. בעבודה זו אנו מתארים בפירוט מודל חבלה של פגיעה בחוט השדרה בעכברים ואחרי השתלה של תאי גזע עצביים.

השתלת תאי גזע עצבית בדגם ניסיוני של Contusive פגיעה בחוט השדרה

פגיעות חמורות בחוט השדרה גורמות לעתים קרובות למומים ברקמות. שתי אפשרויות מתוארות כדי לגשר בהצלחה על פערים כאלה כדי לקדם הסתגלות רקמות, תגובות רגנרטיביות ושיפור תפקודי בחולדות באמצעות השתלת מערכת מיקרו-מחברים מכנית לאחר פציעה חריפה וחמישה שבועות לאחר חתך מלא של חוט השדרה.

אסטרטגיות ניסיון לגשר על פערים גדולים של רקמה בחוט השדרה נפגע לאחר חריפת נגע כרוני

מאמר זה מתאר שיטה להוספת צינור חלול בין גדמי חוט השדרה לאחר חיתוך מלא מילוי עם תאי שוואן (SCs), קרום המרתף להזרקה מטריקס על מנת לגשר, לקדם התחדשות האקסון על פני הפער.

השתלת של שוואן תאים בתוך תעלות PVDF-TrFE לגשר עכברוש Transected גדמי חוט השדרה כדי לקדם התחדשות האקסון על פני הפער

במאמר זה, אנו מספקים שיטה ניתנת לשחזור ליצירה ותחזוקה של פרוסות אורגנוטיפיות ארוכות טווח של חוט השדרה שהושתלו בתאי גזע עצביים כמודל ex vivo לבדיקת טיפולים תחליפיים תאיים.

תרבית פרוסה אורגנוטיפית של חוט השדרה של עכבר לטווח ארוך כפלטפורמה לאימות השתלת תאים בפגיעה בחוט השדרה

במחקר זה, פותחו ואופיינו הידרוג'לים מרוכבים מחקי עצב שניתן להשתמש בהם כדי לחקור ולהפיק תועלת מההתנהגות הפרו-רגנרטיבית של תאי גזע שמקורם בשומן לתיקון פגיעות בחוט השדרה.

פיתוח טיפולים קומבינטוריים לפגיעות בחוט השדרה באמצעות העברת תאי גזע

הפרוטוקול הנוכחי מתאר פיתוח של מודל עכברי הניתן לשחזור של גליומה של חוט השדרה על ידי הזרקת תאי גידול לחלל הבין חולייתי, ומציע גישה יעילה יותר ופחות פולשנית למחקר ופיתוח טיפולי.

השתלה כירורגית של תאי גידול בחוט השדרה של עכברים

למד השתלת תאי מקדם עצביים לחוט השדרה הצווארי בחולדות ובעכברים. שיטה זו מאפשרת מעקב אחרי שרידות, נדידה והתמיינות התאים לאחר השתלה.

Intraspinal השתלת תאים עבור מיקוד הורן הגחון צוואר הרחם ב טרשת לרוחב amyotrophic וקורד טראומטית פגיעה בעמוד השדרה

גלה סרטונים נוספים