הדמיה מבוססת מיקרוסקופיה TIRF של היווצרות וסגירת פגוזום
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 4:13 דק׳ • July 8th, 2025
קח צלחת תחתית זכוכית מצופה פולימר המכילה תאי דם אדומים או RBCs דבוקים לפני השטח שלה.
הניחו את המנה על שלב מיקרוסקופ פלואורסצנטי השתקפות פנימית כוללת, ושמרו עליה בטמפרטורה פיזיולוגית.
הוסף מקרופאגים המכילים פפטידים ציטופלזמיים בעלי תווית פלואורסצנטית הנקשרים לאקטין מפולימר, מה שמקל על הדמיית שלד התא.
במהלך ההדמיה, כוון קרן לייזר בזווית העולה על הזווית הקריטית, מה שגורם להשתקפות פנימית וליצירת גלים חולפים בנקודת המגע.
הגלים החולפים מאירים באופן סלקטיבי את הפלואורופורים בממשק דגימת הזכוכית, ומאפשרים הדמיה בזמן אמת של פגוציטוזיס.
קולטני Fc של מקרופאגים נקשרים ל-RBC אופסוניזציה של IgG, וגורמים להתקבצות קולטנים סביב אזור המגע.
אשכולות מפעילים מסלולי איתות תוך-תאיים והפעלת GTPase, מניעים פילמור אקטין וגיוס דינמין, ויוצרים פסאודופודים.
הפסאודופודים משתרעים סביב ה-RBC ויוצרים פגוציטית.
בסופו של דבר, קצות הפסאודופודים מתמזגים. הדינמין המצטבר מתווך את הפרדת הפגוזום מקרום התא, ומפנים את ה-RBC האופסוני.
לקיבוע לא קוולנטי של ה-SRBCs, שפכו 2 מיליליטר של תאים אופסוניים של IgG לכל אחד מהכלים המצופים פולי-ליזין, וצנטריפוגה את הדגימות בצנטריפוגת רוטור מתנדנדת. השליכו את חומרי העל, ושטפו את החלקיקים פעם אחת עם 2 מיליליטר PBS בתוספת 10% BSA.
לאחר מכן, דגרו את החלקיקים עם 2 מיליליטר PBS טרי בתוספת 10% B
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים