בדיקה מבוססת תאים להערכת ספיגת חלבון טאו על ידי מיקרוגליה
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 5:22 דק׳ • July 8th, 2025
התחל עם צלחת מרובת בארות עם תחתית שטוחה המכילה מיקרוגליה עכברית דבוקה - תאים פגוציטים במוח.
הכניסו מדיום נטול סרום המכיל אימונוקומפלקסים. קומפלקסים אלה מורכבים מנוגדנים המחוברים לאגרגטים של חלבון טאו זרחני, הנוצרים במהלך מחלות ניווניות מסוימות.
אגרגטי הטאו מסומנים בצבע פלואורסצנטי ירוק רגיש ל-pH.
במהלך הדגירה, קומפלקסים אימונולוגיים אלה מקיימים אינטראקציה עם קולטני ה-Fc של תאי מיקרוגליה, מה שמקל על בליעתם.
אנדוזום זה המכיל קומפלקס חיסוני מתמזג עם ליזוזום ויוצר אנדוליזוזום. הסביבה החומצית של האנדוליזוזום גורמת למולקולות הצבע להאיר.
שטפו כדי להסיר את הקומפלקסים החיסוניים הלא מופנמים.
טפל בתמיסת טריפסין-EDTA כדי לנתק את התאים.
העבירו את תרחיף התא לצלחת U-bottom הממוקמת מעל קרח כדי לייצב את האנדוליזוזום. גלולה את התאים והשליך את הסופרנטנט.
שטפו והשעו מחדש את התאים עם מאגר FACS.
באמצעות FACS, זהה את התאים החיים הבודדים וכימת את עוצמת הקרינה הירוקה כדי להעריך את ספיגת הטאו על ידי מיקרוגליה.
ביום הראשון של הניסוי הכינו את תאי BV-2 על ידי שטיפתם תחילה עם PBS 1x בבקבוק שבו הם גודלו. לאחר מכן, דגרו אותם עם 0.05% טריפסין EDTA ב-37 מעלות צלזיוס ו-5% CO2 עד שהם מתנתקים מהבקבוק. השעו מחדש את התאים במדיום התרבית על ידי פיפטינג למעלה ולמטה 3 עד 5 פעמים.
ספרו תאים והכינו תרחיף תאים בריכוז סופי של 1
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים