שיטה לטיפול במלח גבוה בתאים דנדריטיים והעברתם המאומצת לעכברים

התחל עם צלחת מרובת בארות המכילה השעיה של תאים דנדריטיים או DCs.

כדי לחקות מצב יתר לחץ דם, הוסף מדיום תרבית המכיל ריכוז גבוה של יוני נתרן ודגירה.

במהלך הדגירה יוני נתרן נכנסים לתא, ומגדילים את ריכוז הנתרן התוך תאי.

זה מפעיל החלפה של יוני נתרן תוך תאיים עם יוני סידן חוץ-תאיים.

רמות סידן פנימיות מוגברות מפעילות מסלולים המאפשרים יצירת אלדהידים תגובתיים, הנקשרים לחלבונים התאיים. זה מפעיל את ה-DCs, שמציגים את החלבונים המהונדסים האלה על פני השטח שלהם.

לאחר הדגירה, אספו את התאים בצינור ובצנטריפוגה.

הסר את ה-supernatant. הוסף מאגר טרי כדי להשעות מחדש את התאים.

משוך את מתלה התאים למזרק.

קח עכבר מורדם והזריק את תרחיף התא רטרואורביטלית, שהוא אזור מאחורי ארובת העין.

תהליך זה של הזרקת תאים חיסוניים מופעלים נקרא העברת תאים מאמצים.

פיפטה 900 מיקרוליטר של מתלה DC לתוך צלחת בז שטוחה עם תחתית שטוחה עם 24 בארות. הוסף 100 מיקרוליטר ממצע תרבית DC עתיר מלח לכל באר לריכוז נתרן סופי של 190 מילימולר. סמן את הצלחת והניח אותה בחממת פחמן דו חמצני לחה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 48 שעות.

לאחר 48 שעות, הוציאו את הצלחת מהחממה. נגב את אמצעי תרבית התאים בבאר אחת למעלה ולמטה כדי להשעות מחדש את ה-DCs החיוביים ל-CD11c. העבירו את כל המתלים לתוך צינור מתאים של 1.6 מיליליטר. חזור על כך עבור כל באר בודדת שהייתה מצופ