טכניקה לתרבית תאי עצב בהיפוקמפוס עכבר

קח היפוקמפוס גור עכברים שנקטף במאגר.

חותכים את ההיפוקמפוס לשברים קטנים יותר ומעבירים אותם לצינור חרוטי.

שוטפים את הרקמה עם חיץ. לאחר שהשברים מתייצבים, הסר את המאגר. כעת, הוסף בופר טרי וטריפסין.

במהלך הדגירה, טריפסין, אנזים פרוטאוליטי, מעכל את המטריצה החוץ-תאית של הרקמה, ומשחרר את תאי העצב בהיפוקמפוס.

שוטפים את הרקמה המעוכלת עם חיץ.

לאחר שהשברים מתייצבים, הסר את המאגר. הוסף חיץ טרי ופיפטה את הרקמה שוב ושוב כדי לנתק אותה מכנית, ולקבל תרחיף של תא בודד.

לאחר שהרקמה הלא מעוכלת מתייצבת, העבירו את תרחיף התאים על כיסויים מצופים פולי-L-ליזין עם תומכי שעווה בתוך צלחת תרבית המכילה מדיה.

התאים מתחברים למשטחים המצופים בפולי-L-ליזין באמצעות אינטראקציות אלקטרוסטטיות.

כעת, הנח את הכיסויים המודבקים לתאי העצב עם הפנים כלפי מטה לתוך צלחת המכילה תאים גליאליים או לא עצביים בקליפת המוח במדיה נטולת סרום.

בתרבית, שעווה תומכת במניעת מגע ישיר בין תאי עצב לתאי גליה, ויוצרת מיקרו-סביבה שבה גורמים המופרשים מתאי גליה מקדמים הישרדות והתבגרות של תאי עצב

.

כדי להתחיל, נתחו שישה עד שמונה היפוקמפוס מגורים בני יום אחד לאחר הלידה עם מדיום HBSS בצלחת פטרי. קוצצים את ההיפוקמפוס בעזרת מספריים לחתיכות קטנות יותר, ומעבירים אותם מהצלחת לצינור של 15 מיליליטר. שוטפים את ההיפוקמפוס פעמיים עם 5 מיליליטר HBSS, ומשאירים אותם ב -4.