אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 7:00 דק׳ • July 8th, 2025
קח מיקרו-צלחת מצופה מטריצה חוץ-תאית והוסף תאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים תלויים בתווך התמיינות.
המדיום מכיל מולקולות איתות המשפיעות על מסלולי איתות תאיים, ומכוונות את ההתמיינות לתאי אב עצביים.
הכנס מדיום התמיינות נוסף המכיל מולקולות איתות הגורמות להתמיינות לתאי פסגה עצבית, או NCCs, קודמים לתאים עצביים ולא עצביים.
הוסף אנזימים כדי לשבש את המטריצה, ובכך להפריד את התאים.
שטפו כדי לנטרל את האנזימים, ואז צנטריפוגה והשליכו את הסופרנטנט. השעו מחדש את ה-NCCs בתווך ספרואיד והעבירו אותם למיקרו-פלטה.
גורמי הגדילה והמולקולות הקטנות של המדיום גורמים להיווצרות ספרואידים.
תוסף עם חומצה רטינואית, המעודדת התמיינות לתאי עצב אב סימפתטיים.
העבירו את הספרואיד על מיקרו-לוחית מצופה חלבון הידבקות במדיום התבגרות של נוירונים סימפתטיים, מה שגורם להתקשרות ספרואידית.
גורמי גדילה עצביים וחומצה רטינואית במדיום מקדמים התבגרות לנוירונים סימפתטיים פוסט-גנגליונים, המהווים חלק ממערכת העצבים ההיקפית ומווסתים תהליכים לא רצוניים.
יום אחד לפני אינדוקציה של התמיינות, מצפים את המספר המתאים של צלחות שש בארות בשני מיליליטר מטריצת קרום מרתף לבאר, ומאחסנים את הלוחות בארבע מעלות צלזיוס למשך הלילה. למחרת בבוקר, חממו את הצלחות לטמפרטורת החדר, ושטפו את תרבית תאי הגזע הפלוריפוטנטיים האנושיים המוכנים לפיצול פעמיים עם PBS טרי לכל שטיפ
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים