אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 3:14 דק׳ • July 8th, 2025
קחו תרבית של תאי אב עצביים אנושיים, או NPCs, הנתמכים על מטריצה חוץ-תאית.
ה-NPCs מתוכננים לבטא חלבון פלואורסצנטי.
השליכו את המדיום ושטפו את התאים כדי להסיר את כל המדיום שנותר.
דגרו את התרבות עם אנזימים המשבשים את המטריצה, ומפרקים את התאים.
העבירו את התאים המנותקים לצינור והוסיפו מדיום לנטרול הפעולה האנזימטית.
צנטריפוגה כדי לגלול את התאים, להשליך את הסופרנטנט ולהשעות מחדש את ה-NPCs בתווך התמיינות עצבי.
העבירו את ה-NPCs לתרבית משותפת מבוססת של אסטרוציטים של עכברים ונוירונים בקליפת המוח של חולדות.
גורמי גדילה המשתחררים על ידי התרבות המשותפת המבוססת, יחד עם מגעי התא-תא של ה-NPCs עם הנוירונים והאסטרוציטים בקליפת המוח, מקדמים התמיינות של ה-NPCs לנוירונים בוגרים.
הנוירונים הבוגרים מציגים תהליכים תאיים מורחבים ויוצרים קשרים סינפטיים.
תחת מיקרוסקופ קונפוקלי, השתמש באות מהחלבונים הפלואורסצנטיים כדי לדמיין את הנוירונים האנושיים שמקורם ב-NPC.
לאחר יצירת תאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים או iPSCs, יש להשרות ולתחזק את התאים כתא אב עצבי אנושי או תרבית NPC על פי פרוטוקול הטקסט. בדוגמה זו, ה-NPCs מסומנים באמצעות הווקטור ה-lentiviral Synapsin1-tdTomato. יום לאחר הוספת נוירונים ראשוניים לתרבית אסטרוציטים, השתמשו ב-1X PBS כדי לשטוף NPCs אנושיים פעם אחת. לאחר מכן, הוסיפו תמיסת ניתוק תאים ודגרו במשך חמש דקות
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים