שיטת מבחנה ליצירת אורגנואידים אנושיים במוח

התחל בתרבית של נוירוספרות, אשכולות צפים חופשיים של תאי אב נוירו-אפיתליים.

העבירו את הנוירוספרות הללו ליריעת הטבעה.

הסר מדיה. הוסף טיפה של מטריצת ממברנה חוץ-תאית המכילה חלבונים וגורמי גדילה לכל נוירוספרה.

דגירה כדי שהמטריצה תתמצק, והטמיעה בתוכה את הנוירוספרות.

כעת, העבירו את הנוירוספרות המוטמעות במטריקס באמצעות מדיה נוירוספירית ללוח תרבית המכיל מדיה נוירוספרית.

דגירה. מטריצת הממברנה החוץ-תאית ומרכיביה מקלים על התמיינות תאי אב נוירו-אפיתל לתאים נוירו-אפיתליים המתרבים ויוצרים לומן מלא בנוזל.

לאחר הדגירה, העבירו נוירוספרות לבקבוק ספינר המכיל מדיה אורגנואידית מוחית מחוממת מראש. דגירה תוך ערבוב לשיפור דיפוזיה של חמצן וחומרים מזינים, המקדמת צמיחה תאית.

גורמי גדילה ומעכבי מולקולות קטנות במדיה מקדמים התמיינות עצבית ומתפתחים לתאים של אזורים ספציפיים במוח, ויוצרים אורגנואידים במוח בוגרים.

כדי להתחיל בהליך זה, אסוף את הנוירוספרות בעזרת מיקרופיפטה של 200 מיקרוליטר, בעזרת קצה של 2 מילימטר שנחתך בעבר במספריים סטריליים. לאחר מכן, הניחו את הנוירוספרות במרחק של כ -5 מילימטרים זו מזו על סרט פרפין בצלחת של 100 מילימטר, והסירו בזהירות כמה שיותר מהמדיום שנותר. לאחר מכן, הוסף טיפה של מטריצת EHS על כל נוירוספירה בודדת.

דגירה של טיפות מטריצת EHS עם הנוירוספרות למשך 15 דקות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס. לאח