יצירת אורגנואידים מוחיים פלוריפוטנטיים המושרים שמקורם בתאי גזע

קחו מושבות של תאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים, או iPSCs, שגודלו על מטריצה תומכת.

הוסף תמיסה המכילה אנזימים כדי לפרק את המושבות לתאים בודדים.

העבירו את התאים לתוך צינור, צנטריפוגה והשליכו את הסופרנטנט.

להשעות מחדש את תאי ה-iPSC במצע גידול.

העבירו את התאים למיקרו-פלטה המכילה סיבי פולימר תואמים ביולוגית.

צנטריפוגה לאגרגציה של iPSCs, ויוצרת גופים עובריים, או EBs, על פיגום הפולימר.

מעבר למדיום אינדוקציה עצבית המקדם התפשטות והתמיינות iPSC לתאי גזע עצביים, תאי אב ונוירונים לא בשלים.

עם הדגירה, התאים עוברים ארגון עצמי.

הניחו את הגופים העובריים על יריעה עם גומות והוסיפו טיפות המכילות חלבוני מטריצה חוץ-תאיים.

דגירה כדי למצק את המטריצה, להטמיע את ה- EBs.

העבירו את ה-EBs למיקרו-פלטה המכילה מדיום תחזוקה עצבי. דגירה.

ה-EBs עוברים התפשטות תאית ליצירת בליטות וניצנים ומתמיינים לנוירונים בוגרים, ויוצרים אורגנואידים מוחיים.

שאפו את המדיום בעזרת פיפטה, ושטפו את התאים פעם אחת עם DPBS. לאחר מכן, הוסיפו 500 מיקרוליטר של תמיסת ניתוק תאים, או 0.5 מילי-מולרי EDTA, כדי לנתק את המושבות, ודגרו בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 3 עד 5 דקות. לאחר מכן, הוסף 1 מיליליטר של מדיה E8 טרייה לכל באר, ופיפטה בעדינות כדי לנתק את כל התאים.

העבירו את כל מתלה התא לצינור צנטריפוגה של 15 מילימטר, והוסיפו עוד 1 מיליליטר של מדיה E8