טכניקה עקיפה של תרבית נוירון-אסטרוציטים לחקר אינטראקציות נוירון-גליה

התחל עם צלחת מרובת בארות המכילה תוספת קרום חדירה המצופה בפולי-D-ליזין.

הוסף מצע גידול אסטרוציטים לבאר וזרע אסטרוציטים, תא גליה מיוחד, לתוך התוספת.

דגירה כדי לאפשר היצמדות תאים לפולי-D-ליזין באמצעות אינטראקציות אלקטרוסטטיות וליצור שכבה חד-שכבתית.

החלף את מדיום האסטרוציטים במדיום תרבית נוירונים.

העבירו את התוספת הזו לצלחת מרובת בארות המכילה נוירונים עובריים ראשוניים של עכבר דבוקים מעל כיסוי מצופה פולימר.

דגירה כדי ליצור קו-תרבית עקיפה של נוירון-אסטרוציטים, שבה שני סוגי התאים מופרדים פיזית אך חולקים את אותו מדיום תרבית.

אסטרוציטים מפרישים גורמים נוירוטרופיים שונים החיוניים להישרדות ולצמיחה של תאי עצב.

גורמים אלה נודדים דרך התמיכה החדירה ומקיימים אינטראקציה עם נוירונים ראשוניים. זה מקדם את הבידול שלהם ויוצר הקרנות עצביות.

הקרנות אלה מאריכות ויוצרות קשרים סינפטיים בין נוירונים, מה שמעיד על אינטראקציות נוירוניות-גליאליות.

מצפים כל תוספת ב-10 מיקרוגרם למיליליטר פולי-D-ליזין ודוגרים למשך שעה. לאחר שעה יש לשטוף את התוספות פעמיים עם PBS.

בינתיים, שאפו את מדיום האסטרוציטים ושטפו את התרבית פעם אחת עם 10 מיליליטר PBS כדי להבטיח הסרת שאריות סרום. לאחר מכן, הוסיפו 3 מיליליטר של 0.05% טריפסין EDTA לצלוחיות ודגרו על התאים לטריפסיניזציה למשך כ-10 דקות. לאחר מכן, השעו בעדינות את התאים ב-7 מיליליטר של