פיתוח כדורי נוירונים בטכניקת תרבית טיפות תלויות

התחל בהשעיה חד-תאית של תאי אב עצביים עובריים של עכבר בתווך נוירו-בסיסי.

המדיום מכיל חומרים מזינים חיוניים לשמירה על כדאיות התאים.

הוצא טיפות קטנות של תרחיף תאים זה על המכסה של צלחת תרבית שאינה דביקה, וודא שהם מרווחים זה מזה.

הפוך את המכסה, וכתוצאה מכך נוצרות טיפות תלויות.

מקם את המכסה מעל הכלי המכיל חיץ כדי ליצור סביבה לחה המונעת אידוי מדיה ודגירה.

בתוך הטיפות התלויות, מתח הפנים של הנוזל שומר על צורת הטיפה.

כליאת צורה זו מגבילה את התאים לשטח מוגבל מבלי להתפשט.

בנוסף, כוחות הכבידה בתוך הטיפות מכוונים את התאים לכיוון האזור התחתון.

כאשר תאי אב עצביים באים במגע קרוב יותר, הם מצטברים באופן ספונטני ליצירת מבנה תלת מימדי המכונה כדור נוירונים.

להכנת כדורי נוירונים, התאם את צפיפות התאים בתרחיף תאים זה למיליון תאים למיליליטר באמצעות מדיום NGB. הוסף 7 מיליליטר PBS לחלק התחתון של כלי התרבות. תרבית את הנוירונים בקליפת המוח כטיפות תלויות של 10 מיקרוליטר המכילות 10,000 תאים לטיפה בתוך המכסים העליונים של כלי תרבית של 10 סנטימטרים. שמור את הכלים בחממה למשך שלושה ימים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עם 5% CO₂ בתנאי לחות כדי לאפשר היווצרות כדורי נוירונים.