פיתוח תרבות משותפת של נוירונים ומקרופאגים במבחנה

התחל עם נוירונים מבודדים של גנגליון שורש גב עכברי במדיום גידול.

זרעו אותם על צלחת מרובת בארות מצופה פולימר כדי לקדם התקשרות עצבית.

לאחר מכן, קחו עכבר שעבר המתת חסד והזריקו PBS קר כקרח לחלל הצפק שלו.

עסו בעדינות את הצפק כדי לעקור מקרופאגים מדופן הצפק.

סחטו את העכבר כדי לאסוף את נוזל הצפק ולטפל בו עם מאגר ליזה כדי ליז באופן סלקטיבי את כדוריות הדם האדומות, המופיעות כמזהמים. צנטריפוגה ולהשעות את התאים במדיום תרבית.

העבירו את המקרופאגים לתוספת נקבובית הממוקמת בתוך הבאר המכילה את הנוירונים המתורבתים.

תרבית משותפת זו מאפשרת לנוירונים ולמקרופאגים להיות בסמיכות.

טפל בתרבית המשותפת עם db-cAMP ודגירה כדי להקל על כניסתה לתאים. זה מפעיל את הנוירונים להפריש את מולקולות האיתות.

מולקולות איתות אלה, יחד עם db-cAMP, גורמות למקרופאגים לאמץ פנוטיפ פרו-רגנרטיבי ולהפריש גורמים חיוניים לצמיחה עצבית.

לפני הקמת התרבות, יש לצפות מראש צלחת בת 6 בארות עם פולי-D-ליזין ולמינין. לאחר מכן, דגרו את צלחת 6 הבארות עם 0.01 פולי-D-ליזין ב-37 מעלות צלזיוס למשך שעתיים או ב-4 מעלות צלזיוס למשך הלילה. לאחר מכן יש לשטוף את הצלחת פעמיים במים מזוקקים.

לאחר מכן, דגרו את הצלחת בתמיסת למינין בריכוז של 3 מיקרוגרם למיליליטר למשך שעתיים בטמפרטורת החדר. לאחר מכן, שטפו את הצלחת פעמיים במים מזוקקים, וייבשו את הצלחת בטמפרטורת החדר למש