אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 3:32 דק׳ • July 8th, 2025
התחל עם אדנוזין מונופוספט מחזורי, או cAMP, מולקולת איתות המווסתת תפקודים תאיים שונים. הוסף cAMP לתרבית משותפת של נוירון-מקרופאגים.
מולקולות ה-cAMP מהמדיום וגורמי הגדילה מתאי העצב מעוררים הפעלת מקרופאגים.
העבירו את התוספת עם מקרופאגים מופעלים לבאר אחרת המכילה מדיום תרבית מקרופאגים.
כאן, המקרופאגים משחררים ציטוקינים וכימוקינים לתווך, ויוצרים מדיום מותנה או CM.
צנטריפוגה את ה-CM כדי לגלול את הרכיבים התאיים.
העבירו את ה-supernatant והמסנן כדי להסיר את הפסולת התאית.
הוסף את ה-CM שנאסף לתרבית עצבית. הציטוקינים והכימוקינים ב-CM שנאסף מקדמים את הרחבות הנוירונים.
הוסף פרפורמלדהיד צונן כדי לתקן את התאים.
הוסף מאגר חוסם כדי למנוע קשירה לא ספציפית של נוגדנים. שטפו כדי להסיר את המאגר הנותר.
החל נוגדנים ראשוניים המכוונים לחלבוני השלד התא של הנוירונים. יש לשטוף כדי להסיר נוגדנים לא קשורים.
הוסף נוגדנים משניים מצומדים אדומים-פלואורופור הנקשרים לנוגדנים הראשוניים. יש לשטוף כדי להסיר נוגדנים לא קשורים.
באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי, דמיין את הנוירונים בצבע אדום עם הרחבות.
ארבע שעות לאחר תרבית משותפת של מקרופאג הנוירונים, הוסף 2 מיקרוליטר של תמיסת db-cAMP מיקרו-מולרית לתרביות המקרופאגים של הנוירונים. לאחר 24 שעות, מלאו באר ריקה במיליליטר אחד של מדיום תרבית מקרופאגים באותה צלחת בת 6 בארות.
העבר את הכנ
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים