תרבית נוירונים ראשונית ממודרת באמצעות שבבים מיקרופלואידים מפלסטיק

קח שבב מיקרופלואידי מפלסטיק המורכב ממאגרים ותאים סומטיים, כמו גם מאגרים ותאים אקסונליים, המחוברים באמצעות מיקרו-חריצים.

הוסף תמיסת ציפוי מראש כדי להרוות את התאים והחריצים, ולמנוע לכידת בועות אוויר.

שאפו את התמיסה, והשאירו את התאים הראשיים מלאים. לשטוף עם חיץ.

מצפים את הבארות בפולימר סינטטי המאפשר הידבקות עצבית. שוטפים עם חיץ ומוסיפים מצע תרבית כדי למנוע את התייבשות השבב

כדי לזרוע תרחיף של נוירונים בהיפוקמפוס של חולדות, שאפו את המדיה.

טען את המתלה למאגרים הסומטיים. הנוירונים נכנסים ומתחברים לתא הסומטי.

הוסף אמצעי תרבית עצבית לבארות ודגירה. גורמי גדילה הקיימים בתקשורת מקלים על צמיחה עצבית.

בהדרגה, הנוירונים מרחיבים את האקסונים שלהם, שגדלים לתוך התא האקסונלי דרך המיקרו-חריצים.

צרות החריצים מונעת כניסת גופי תאים עצביים, ומבטיחה הפרדה פיזית של אזורים סומטיים ואקסונליים.

כדי להתחיל, הניחו שבב סטרילי מרובה תאים בצלחת פטרי. הוסף 100 מיקרוליטר של תמיסת ציפוי מקדים לבאר השמאלית העליונה של השבב, ואפשר לו לזרום דרך התעלה הראשית לבאר הסמוכה. לאחר מכן, מלאו את הבאר השמאלית התחתונה של השבב ב -100 מיקרוליטר מתמיסת הציפוי מראש.

הפעם, המתן חמש דקות כדי לאפשר לתמיסה לזרום דרך המיקרו-חריצים. כעת, הוסף 100 מיקרוליטר מתמיסת הציפוי המקדים לבאר הימנית העליונה, ואפשר לו לזרום דרך התעלה הראשית לבאר הסמוכה. לאחר 90 שניות, מלאו את הבאר הימנית התחתונה ב-100 מיקרוליטר מתמיסת הציפוי המוקדם, ודגרו את השבב למשך 10 דקות.

הרחיקו בזהירות את קצה הפיפטה מהתעלה הראשית ושאבו את התמיסה מכל באר. לאחר מכן, הוסף מיד 150 מיקרוליטר PBS לבאר השמאלית העליונה והמתן 1.5 דקות. לאחר מכן, הוסף 150 מיקרוליטר PBS לבאר השמאלית התחתונה, והמתן חמש דקות כדי לאפשר לנוזל לזרום דרך המיקרו-חריצים.

לאחר מכן, הוסף 150 מיקרוליטר של PBS לבארות הימנית העליונה והימנית התחתונה בסדר זה. לאחר 10 דקות, שוב, שאפו את ה-PBS וחזרו על שלבי הכביסה בפעם השנייה. לאחר הכביסה השנייה שאפו את ה-PBS את הבארות כמו קודם על ידי זווית קצה הפיפטה הרחק מפתח התעלה.

לאחר מכן, הוסף 100 מיקרוליטר של 0.5 מ"ג למ"ל תמיסת פולי-D-ליזין לבאר השמאלית העליונה של השבב. המתן דקה וחצי ולאחר מכן, מלא היטב את השמאל התחתון ב-100 מיקרוליטר מתמיסת הפולי-D-ליזין. חזור על תהליך זה בחצי הימני של השבב. סוגרים את צלחת הפטרי, ואז מניחים את הצ'יפס בחממה בחום של 37 מעלות צלזיוס למשך שעה.

לאחר הדגירה יש לשטוף את השבב פעמיים עם PBS כפי שתואר קודם לכן. לאחר מכן, שאפו את ה- PBS מהמכשיר. מיד, הוסף 100 מיקרוליטר של מדיית תרבית תאים לבאר השמאלית העליונה של השבב. לאחר דקה וחצי מוסיפים מדיה לפינה השמאלית התחתונה היטב.

המתן חמש דקות כדי לאפשר למדיה לזרום דרך המיקרו-חריצים ולאחר מכן חזור על תהליך המילוי בצד ימין של השבב. הכן תרחיף תאים של נוירונים בהיפוקמפוס של חולדות מנותקות על פי פרוטוקולים שנקבעו. הסר את רוב המדיה בכל באר של השבב, אך השאר את הערוצים מלאים.

לאחר מכן, טען מיד 5 מיקרוליטר של תרחיף התא לבאר הימנית העליונה ועוד 5 מיקרוליטר של תרחיף תאים בבאר הימנית התחתונה. בעת טעינת התאים, כוון את קצה הפיפטה לכיוון התעלה הראשית. לאחר טעינת התאים, העבירו את השבב לשלב מיקרוסקופ כדי לוודא שהנוירונים נמצאים בערוץ הראשי.

לאחר המתנה של 5 דקות עד שהתאים יתחברו, הוסף כ-150 מיקרוליטר של מצע תרבית עצבי לכל אחת מהבארות הימניות העליונות והתחתונות. לאחר מכן, הוסף 150 מיקרוליטר מדיה לכל אחת מהבארות השמאליות העליונות והתחתונות. מכסים את צלחת הפטרי, ומניחים את הצ'יפס במגש לח בחממה של 5% פחמן דו חמצני 37 מעלות צלזיוס.