גידול נוירונים של גנגליון ספירלי מורין על מערכים מרובי אלקטרודות

התחל עם קטע אוזן פנימית של עכבר מנותח המכיל את הגנגליון הספירלי ואת איבר קורטי, מבנים מיוחדים של האוזן הפנימית.

האיבר של קורטי מכיל תאי שיער הפועלים כקולטנים לאותות שמיעה.

הגנגליון הספירלי מורכב מגופי תאי נוירונים המרחיבים תהליכים לעצבנות תאי השיער של איבר קורטי.

הפרד את הגנגליון הספירלי מהאיבר של קורטי וקבל ממנו קטעי רקמה קטנים או צמחים.

כעת, קחו מערך רב-אלקטרודות מצופה מטריצה חוץ-תאית המכיל אמצעי תרבית.

הנח את האקספלנטים על המערך ומקם את איבר קורטי מחוץ לאזור האלקטרודה. דגירה.

הצמחים מתחברים למשטח הרב-אלקטרודה המצופה.

יש להוסיף באופן קבוע מדיה המכילה חלבונים בסרום וגורמי גדילה.

במהלך התרבות, רכיבי המדיה והאיבר של קורטי מספקים תמיכה נוירוטרופית, ומקדמים צמיחת נויריטים מנוירוני הגנגליון הספירליים מעל המולטי-אלקטרודה.

הפרד את האיבר של קורטי מהגנגליון הספירלי במודיולוס על ידי החזקת החלק הבסיסי של הגנגליון הספירלי והאיבר של קורטי בעזרת מלקחיים, ושחרור איטי של האיבר של קורטי מהבסיס לקודקוד. לאחר מכן, חותכים את האקספלנטים הרוחביים מהגנגליון הספירלי באמצעות מלקחיים או מספריים או סכינים עדינים של מיקרו-דיסקציה.

כעת, העבירו את הגנגליון הספירלי ואת האיבר של קורטי ל-MEA. לאחר מכן, הניחו את ה-SG על אזור האלקטרודה ועל האיבר של קורטי, במרחק של כ-5 מילימטרים מאזור האלקטרודה. הנח את האקספלנטים ואת איבר קורטי על ה-MEA תוך הימנעות מנזק לרקמה. לאחר מכן, הניחו את ה-MEA בזהירות בחממה ובתרבית ב-37 מעלות צלזיוס ו-5% CO₂.

למחרת, בדוק ויזואלית את השתלים לאיתור חיבורם ל-MEAs. לאחר מכן, הוסף 100 מיקרוליטר של מדיום תרבית המכיל 10% FBS ו-BDNF מדי יום במשך חמישה ימים רצופים. ביום השישי, הוסיפו 2 מיליליטר של מדיום תרבית, המכיל 10% FBS ו-5 ננוגרם למיליליטר BDNF, ותרבו את הרקמה למשך 13 ימים נוספים.