תכנות מחדש עצבי ישיר של אסטרוציטים עכבריים לתאי עצב

התחל עם לוח מרובה בארות המכיל אסטרוציטים מהונדסים גנטית. תאים אלה מודבקים לכיסוי המונח בתווך אסטרוציטים.

תאים מהונדסים גנטית אלה מבטאים גורמי טרנספורמציה שמאלצים את המעבר שלהם לנוירונים. תהליך זה נקרא תכנות מחדש עצבי.

קח מדיום התמיינות עצבי המכיל מולקולות ספציפיות ותוסף B27. יחד, רכיבים אלה מספקים חומרים מזינים חיוניים וגורמים להתמיינות.

החלף את תווך האסטרוציטים בתווך ההתמיינות העצבי.

דגרו על האסטרוציטים למשך הזמן הנדרש.

במהלך הדגירה, גורמי הטרנספורמציה המבוטאים על ידי האסטרוציטים מעוררים רצף של אירועים מולקולריים המאפשרים המרה של אסטרוציטים לנוירון.

לנוירונים שהומרו יש גופי תאים קטנים יותר ותהליכים מוארכים, בדומה לנוירונים טיפוסיים.

הכן מדיום התמיינות עצבי על ידי הוספת תוסף מיליליטר B27 אחד ל-49 מיליליטר של מדיום תרבית בסיסי. לאחר 24 עד 48 שעות, תלוי אם התאים עברו התמרה או טרנספטציה, החלף את מדיום האסטרוציטים במדיום התמיינות עצבי של מיליליטר אחד לכל באר. תרבית התאים ב-37 מעלות צלזיוס עם 9% פחמן דו חמצני.

כדי להגביר את יעילות התכנות מחדש, השלם את מדיום ההתמיינות העצבי עם פורסקולין ודורסומורפין לריכוז סופי של 30 מיקרומולר ומיקרומולר אחד בהתאמה בעת החלפת תווך האסטרוציטים בתווך ההתמיינות. כאשר בוחרים לטפל בתאים עם פורסקולין ודורסומורפין, יש לתת מנה שנייה של דורסומורפין יומיים לאחר הטיפול הראשוני. הוסף את הטיפול השני ישירות למדיום התרבית.