יצירת תאי עצב מתאי גזע פלוריפוטנטיים שמקורם בדם

קח מיקרופלייט עם כיסויי זכוכית המונחים בתחתית הבארות.

הכניסו פולימר טעון חיובי לציפוי הכיסויים ושטפו כדי להסיר כל פולימר לא קשור. טפל בחלבון מטריצה חוץ-תאית כדי לצפות את הכיסויים ולשאוף את החלבונים הלא קשורים.

הציפוי משמש כמצע תרבית המאפשר הידבקות תאים.

הוסף מדיום אינדוקציה לבארות והכנס תרחיף של תאי גזע פלוריפוטנטיים שמקורם בדם, או BD-PSCs. תאים אלה, המסוגלים להתמיין לסוגי תאים שונים, נוצרים באמצעות תכנות מחדש של תאי אב בדם.

דגירה כדי שהתאים ידבקו למצע. גורמי גדילה וחומרים מזינים במדיום האינדוקציה הופכים BD-PSCs לתאי אב עצביים.

להציג מדיום התמיינות המכיל גורמי גדילה עצביים ולדגור, תוך הפעלת התמיינות של האבות העצביים לפנוטיפ עצבי, המציג תהליכים תאיים מורחבים ומגעים בין תאים.

מניחים כיסויי זכוכית בצלחות של 4 בארות ומצפים אותם בפולי-L-אורניתין מדולל של 1 עד 5 במים מזוקקים כפולים. לאחר דגירה של הכיסויים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך שעה, יש לשטוף אותם במים מזוקקים כפולים.

הפשירו לאט 0.5 עד 2 מיליגרם למיליליטר למינין, והוסיפו אותו לחלק העליון של הכיסויים. דגרו אותם בחום של 37 מעלות צלזיוס למשך שעתיים, ואז הסירו עודפי למינין על ידי פיפטינג, והוסיפו מדיום עצבי N2 לכלי התרבות.

תרבית תאי CD45 שליליים שמקורם ב-BD במדיום N2 על כיסויי זכוכית מצופים למינין-אורניתין למשך יומיים באינקובטור, ע