גדילה והתמיינות של נוירונים בעלי ננו-חלקיקים מגנטיים על פלטפורמות מגנטיות

התחל בהוספת תאים עצביים למדיום מתאים בצלחת תרבית.

הוסף ננו-חלקיקים מגנטיים פלואורסצנטיים, או MNPs, המכילים ליבה מגנטית המתויגת בצבע פלואורסצנטי.

במהלך הדגירה, התא לוקח את ה-MNP באמצעות אנדוציטוזיס והופך לממוגנט.

מניחים מצע ממוגנט נקי בתבנית תרבות. למצע זכוכית זה יש דפוסים גיאומטריים משובצים עם תכונות מגנטיות.

עקר את המצע על ידי חשיפתו לאור אולטרה סגול.

מצפים את המצע בקולגן כדי לקדם את הצמדת התאים.

הוסף את התאים הטעונים ב-MNP למצע ודגירה.

השדה המגנטי החיצוני של המצע מושך את התאים הטעונים ב-MNP ומאפשר את הצמדתם.

הוסף מדיום המכיל גורם גדילה ספציפי במרווחי זמן קבועים.

גורם הגדילה מסייע לתאים ביצירת הרחבות, בעוד שהתבנית המגנטית של המצע מכוונת את כיוון ההרחבות הללו.

זרע מיליון תאים בצלחת רגילה ולא מצופה של 35 מילימטר. הוסף את הנפח המחושב של תרחיף MNP ומדיום הבידול למנה כדי להשיג את ריכוז ה-MNP הרצוי. מערבבים את התאים, ה-MNPs ומדיום ההתמיינות, ואז מדגרים את המנה בחממה לחה של 5% פחמן דו חמצני ב-37 מעלות צלזיוס למשך 24 שעות.

נקו את המצע המעוצב עם 70% אתנול, והניחו אותו בכלי תרבית בגודל 35 מילימטר במכסה המנוע. הנח מגנט גדול מתחת למצע המעוצב למשך דקה אחת, ולאחר מכן הסר אותו על ידי הזזת המנה למעלה והרחקה, והוצאת המגנט ממכסה המנוע. הדליקו את האור האולטרה סגול למשך 15 דקות.

להכנת מצע זכוכית מצופה קולגן, יש לדלל קולגן מסוג I ביחס של 1 ל-50 באתנול של 30%. מכסים את הכוס בתמיסה. השאירו את המנה חשופה במכסה המנוע למשך ארבע שעות עד שכל התמיסה תתאדה. לאחר מכן, שטפו אותו שלוש פעמים ב-PBS סטרילי. הסר את התאים מהחממה. צנטריפוגה את תרחיף התא למשך 5 דקות בחום של 200 גרם והשליכו את הסופרנטנט. השעו מחדש את התאים במיליליטר אחד של מדיום התמיינות טרי, וספרו את התאים באמצעות המוציטומטר.

זרע 10⁵ תאים על גבי המצע בצלחת תרבית של 35 מילימטר, והוסף 2 מיליליטר של מדיום התמיינות. דגרו את התרבית בחממה לחה של 5% פחמן דו חמצני בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס. לאחר 24 שעות, הוסף 1 עד 100 בטא-NGF עכברי טרי לתאים. חדש את מדיום הבידול והוסף בטא-NGF טרי כל יומיים.