JoVE Encyclopedia of Experiments
מדעי המוח
0 צפיות • 1:56 דק' • July 8th, 2025
התחל עם צלחת מרובת בארות המצופה במטריצת קרום מרתף הכוללת פולימרים חוץ-תאיים וחלבוני הידבקות.
זרעו את הבארות בתרחיף חד-תאי של תאי גזע עובריים אנושיים במדיום גידול המכיל מעכב רו-קינאז.
דגירה כדי לאפשר חיבור של תאי גזע למטריצה.
התאים סופגים את המעכב, החוסם את אנזימי הרו-קינאז ומונע מוות של תאים אפופטוטיים.
זה מקדם את הישרדות התאים ושומר עליהם במצב לא ממוין.
החלף את מצע הגידול במדיום אינדוקציה עצבי עשיר בגורמי גדילה ומכיל מעכבים המכוונים לקולטני ALK ספציפיים.
מעכבים אלה מקיימים אינטראקציה עם הקולטנים שלהם וחוסמים את מסלולי האיתות BMP ו-TGF-β, ומונעים את התמיינות התאים לקודמנים אנדודרמליים או מזודרמליים.
זה מוביל להתמיינות סלקטיבית של תאי גזע לקודמנים אקטודרמליים.
קודמנים אקטודרמליים אלה מנצלים חומרים מזינים וגורמי גדילה מהמדיום כדי להתרבות ומאוחר יותר להתמיין לתאי אב עצביים.
צלח את התאים על מטריצת ממברנת מרתף מצופה צלחת 6 בארות בצפיפות של 2 x 105 תאים לבאר ב -2 מיליליטר של mTeSR1 עם מעכב ROCK מיקרו-מולרי 10. לאחר 24 שעות, החלף את מדיום התרבות במדיום אינדוקציה עצבי בתוספת 1 דורסומורפין מיקרו-מולרי ו-5 מיקרו-SB431542. החלף את המדיום כל יומיים במהלך ארבעת הימים הראשונים של האינדוקציה העצבית, ואז כל יום, עד שמגיעים למפגש ביום השביעי.