בידוד ותרבית של תאי מיקרוגליה ממוחות של חולדות באמצעות מדיה נטולת סרום

קחו למשל מוח של עכברוש מפוצץ. טוחנים אותו לשברים קטנים.

הומוגניזציה של הרקמה במאגר כדי לשחרר תאים, כולל מיקרוגליה.

לאחר שהרקמה הלא מעוכלת מתייצבת, אספו את התאים המכילים סופרנטנט והוסיפו חוצץ הפרדת מיאלין.

מערבבים את התכולה והצנטריפוגה כדי להפריד תאים מהמיאלין והפסולת. יש להסיר את שכבת פסולת המיאלין ואת העל-נטנט.

השעו מחדש תאים במאגר ופיפטה כדי להפריד גושים.

העבירו את המתלה דרך מסננת כדי להסיר את אגרגט התאים הנותרים.

העבירו את התאים המסוננים לצלחת תרבית המצופה בנוגדנים חד-שבטיים ספציפיים למיקרוגליה. דגירה כדי להקל על הידבקות מיקרוגליה.

יש לשטוף עם חוצץ כדי להסיר תאים שאינם נדבקים. מוסיפים טריפסין ודוגרים כדי לשחרר מיקרוגליה.

הסר טריפסין.

הוסיפו מדיה ללא סרום. דגירה על קרח כדי להחליש אינטראקציות בין תא למצע.

פיפטה ואוספים את המתלה בצינור. צנטריפוגה והסר את הסופרנטנט.

השהה מחדש את המיקרוגליה במדיה נטולת סרום והעביר לצלחת מרובת בארות מצופה קולגן. דגירה כדי להקל על הידבקות מיקרוגליה.

הוסף מדיה עם גורמי גדילה ושומנים. דגירה להבשלת מיקרוגליה.

לאחר שהמוחות נאספו ב-DPBS קרים, קוצצים כל מוח לקוביות של מילימטר אחד בצלחת פטרי על קרח עם להב אזמל קר, ומעבירים להומוגניזטור Dounce קר כקרח עם 5 עד 7 מיליליטר של חוצץ קר כקרח. לאחר מכן, השתמש בהומוגנייזר Dounce רופף כדי לנתק את הרקמה עם 10 עד 20 משיכ