JoVE Encyclopedia of Experiments
מדעי המוח
0 צפיות • 3:59 דק' • July 8th, 2025
התחילו עם מוח מבודד. טבלו במהירות את המוח בנוזל מוחי מלאכותי מקורר מראש או aCSF כדי להשהות את התהליכים המטבוליים.
ה-aCSF מכיל NMDG, קטיון אורגני גדול המפחית פגיעה ומוות של תאי עצב
.ה-aCSF מכיל גם HEPES, השומר על pH וריכוז מלח ומונע נפיחות ונזק לתאים.
העבירו את המוח לצלחת פטרי המכילה נייר פילטר.
חתוך את המוח כדי להשיג את האזור הרצוי.
תקן את גוש המוח במחזיק הדגימה בעזרת דבק מתאים והטמיע אותו באגרוז.
מקם את מחזיק הדגימה בפורס.
מלאו את מיכל הפורס ב-aCSF מקורר מראש ואווררו את התמיסה כדי להבטיח אספקת חמצן אופטימלית.
השג חלקים מגוש המוח.
העבירו את החלקים לתוך ה-aCSF שחומם מראש כדי להפעיל מחדש את התהליכים המטבוליים, ולאפשר לחלקים להתאושש.
הוציאו בעדינות את המוח השלם לתוך הכוס של NMDG-HEPES aCSF מקורר מראש ואפשרו למוח להתקרר באופן אחיד למשך כדקה אחת. כעת, השתמשו במרית גדולה כדי להעביר את המוח מהכוס לצלחת הפטרי, מכוסה בנייר פילטר.
חתוך והרכיב את המוח, בהתאם לזווית החיתוך המועדפת ולאזור העניין הרצוי במוח. עבוד במהירות כדי למנוע מחסור ממושך בחמצן במהלך הטיפול. לאחר מכן, הדביקו את גוש המוח למחזיק הדגימה, באמצעות דבק דבק.
החזר את החלק הפנימי של מחזיק הדגימה כדי למשוך את גוש המוח במלואו פנימה. לאחר מכן, שפכו את האגרוז המותך ישירות לתוך המחזיק עד שגוש המוח מכוסה במלואו באגרוז. לאחר מכן, מהדקים את בלוק הקירור של האביזר המקורר מראש סביב מחזיק הדגימה למשך 10 שניות עד שהאגרוז מתמצק.
הכנס את מחזיק הדגימה לתוך השקע במכונת החיתוך וודא יישור תקין. לאחר מכן, מלאו את המאגר בשארית NMDG-HEPES aCSF מקורר מראש ומחומצן מכוס ה-250 מיליליטר והניחו אבן בועה במאגר למשך החיתוך כדי להבטיח חמצון נאות.
לאחר מכן, התאימו את המיקרומטר כדי להתחיל לקדם את דגימת המוח המוטמעת באגרוז. הפעל את הפורס והתאם באופן אמפירי את המהירות המתקדמת ותדירות התנודה לרמה הרצויה. המשיכו להתקדם ולחתוך את הרקמה במרווחים של 300 מיקרומטר עד שהאזור המעניין במוח נחתך במלואו. הזמן הכולל להליך החיתוך צריך להיות פחות מ -15 דקות.
לשחזור ראשוני של NMDG, עם השלמת הליך החיתוך, אוספים את כל הפרוסות באמצעות פיפטת פסטר מפלסטיק חתוכה ומעבירים אותן לתא התאוששות של 34 מעלות צלזיוס, מלא ב-150 מיליליטר של NMDG-HEPES aCSF.
העיתוי של שלב ההתאוששות החריף של פרוסת המוח חשוב מאוד כדי להיות מסוגל למצוא איזון בין שימור מורפולוגי לבין התאוששות תפקודית של התכונות האלקטרופיזיולוגיות של כל נוירון.