טכניקה לדגירת רקמה עצבית ממושכת של הרשתית

קח עין עכבר שלמה בנוזל מוחי מלאכותי, או aCSF, וחתך כדי לבודד את העין המכילה את הרשתית.

טפל בתמיסה אנזימטית להסרת הממברנה המגבילה הפנימית, וחשיפת תאי העצב

.

טבלו את הרקמה בתמיסת עיכוב כדי לעצור את העיכול, ושטפו כדי להסיר עודפי תמיסה.

הניחו את הרקמה בחממה מיוחדת בטמפרטורה נמוכה כדי להאט את חילוף החומרים התאי, תוך שמירה על הרקמה.

חממה זו כוללת תא ראשי עם רשת להרכבת רקמות. החדר מלא ב-aCSF, והטמפרטורה וה-pH שלו נשלטים כדי לשמר את פונקציונליות הרקמות.

כדי למנוע זיהום מיקרוביאלי, ה-aCSF נשאב לתוך תא אחר ומטופל בקרינה אולטרה סגולה כדי להרוג כל חיידק.

לאחר מכן נשאב ה-aCSF המעוקר בחזרה לתא הראשי.

כדי לבודד את הרשתית, הסר את העין, הפרד את הרשתית מהרקמה שמסביב והחזיר אותה לאינקובטור.

להכנת תושבת שלמה ברשתית, יש להוציא מיד את העיניים מבעל חיים שעבר המתת חסד. בצע חתך קטן לאורך ה-ora serrata, והנח את העיניים ב-Ames Media או ב-aCSF עם אספקת קרבוגן בטמפרטורת החדר. לאחר מכן, הסר מיד את הקרנית, העדשה והזגוגית על ידי חיתוך לאורך האורה-סרטה במספריים קטנים, והסר אותם בעזרת מלקחיים. מניחים את הרקמה במערכת הדגירה בטמפרטורת החדר.

כדי להסיר את הממברנה המגבילה הפנימית, העבירו את גביעונית העין המכילה את הרשתית לצנצנת זכוכית קטנה המכילה פפאין, L-ציסטאין, EDTA ו-DNAse בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 20 דקות. מ