הסרה סלקטיבית של תאי מיקרוגליה מתרבית נוירונים של גרגיר המוח הקטן של חולדה

קח מוח מוח חולדה שנקטף וקוצץ אותו לשברים.

מעבירים את השברים לצינור המכיל טריפסין ודוגרים.

טריפסין מעכל את המטריצה החוץ-תאית של הרקמה, ומשחרר את תאי העצב של גרגירי המוח הקטן, כמו גם תאים שאינם עצביים כגון מיקרוגליה ואסטרוציטים.

הוסף מאגר המכיל מעכב טריפסין ו-DNase. המעכב מנטרל את הטריפסין ואילו ה-DNase מפרק את ה-DNA המזהם.

צנטריפוגה והשליכו את הסופרנטנט.

השעו מחדש את הרקמה במאגר המכיל את המעכב וה-DNase, ונתקו אותה מכנית ליצירת תרחיף חד-תאי.

שכב את התרחיף על תמיסת חיץ המכילה חלבון.

צנטריפוגה והשליכו את הסופרנטנט המכיל פסולת תאית.

השעו מחדש את התאים במדיה וזרעו אותם על כיסויים מצופים פולי-ליזין כדי להקל על החיבור התאי.

הסר את המדיה. שטפו את התאים במדיה טרייה, ולאחר מכן הוסיפו מדיה המכילה מעכב מחזור תא כדי למנוע התפשטות תאי גליה.

החלף מחצית מהמדיה במדיה טרייה המכילה מעכב ליזוזום.

המעכב מכוון באופן סלקטיבי למיקרוגליה ומשבש את הממברנות הליזוזומליות, וגורם למוות של מיקרוגליה ולהסרה מהתרבית.

התחל הליך זה על ידי איסוף המוח הקטן מגורי חולדות בני ארבעה עד שבעה ימים. מניחים אותם מיד בצלחת פטרי המכילה חמישה מיליליטר תמיסה A על קרח. לאחר מכן, הסר עודפי תמיסה מהמוח הקטן והנח את הרקמה במכסה צלחת הפטרי. לאחר מכן, קוצצים את הרקמה דק בעזרת סכין גילוח להבה היטב לשלושה כיוונים שונים לפחות.

לאחר מכן, הו