הקמת תרבית תלת-ממדית של תאי גלייה שמקורם במוח חולדה

קחו מיקרו-צלחת עם תרבית דבוקה של תאי גליה שמקורם במוח של חולדה. התרבות מכילה אסטרוציטים, מיקרוגליה ואוליגודנדרוציטים.

הסר את המדיום, דגר עם תמיסת אנזים כדי לנתק את התאים ואז העביר אותם לצינור.

צנטריפוגה והסר את הסופרנטנט עם פסולת תאית. השעו מחדש את התאים במדיום חם.

טריטוראט באמצעות מזרק כדי לפרק גושי תאים ולסנן באמצעות מסננת לקבלת תרחיף חד-תאי.

הוסף ביופולימר הניתן לקישור פוטו-צולב, סוכני קישור צולבים ורכיבי מטריצה חוץ-תאיים.

יוצקים את התערובת לתבנית המחוברת לכיסוי. חשפו את התערובת לאור בעוצמה גבוהה כדי לגרום לקישור צולב, ליצור ג'ל ולעטוף את תאי הגליה.

הסר את התבנית והנח את הכיסויים במיקרופלייט. הוסף מדיום חם ודגר את הג'ל בתנאים פיזיולוגיים.

התאים מתרבים בתוך המטריצה החוץ-תאית התומכת ויוצרים רשת סלולרית, ויוצרים תרבית תלת מימדית של תאי גליה.

24 שעות לפני עטיפת התאים, שאפו את המדיום מתרביות ראשוניות של שבועיים, והוסיפו 1 מיליליטר של מדיום טרי לכל באר. ביום עטיפת התאים, הכינו 12.5 מיליליטר טריפסין מדולל ו -25 מיליליטר בינוני לכל צלחת של 12 בארות, וחממו ל -37 מעלות צלזיוס באמבט מים. לאחר מכן, השתמש בפיפטה סרולוגית של 10 מיליליטר כדי להוסיף כ-1 מיליליטר של טריפסין מדולל לכל באר של צלחת 12 הבארות.

דוגרים במשך 20 עד 30 דקות בחום של 37 מעלות צלזיוס ו-5% פחמן דו חמצני עד ששכבת התאים המתכנס